মাইক্রোপ্লেট রিডারের জন্য ইমিউনোঅ্যাসেজ ডেটা পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা এবং পরীক্ষামূলক মান নিয়ন্ত্রণের সম্পূর্ণ গাইড
I. ELISA পরীক্ষার পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা কেন পরীক্ষাগার তথ্যের বিশ্বাসযোগ্যতার জন্য একটি মূল চ্যালেঞ্জ হয়ে উঠেছে
1.১ মিথ্যা নেগেটিভ ফলাফলের কারণে সনাক্তকরণের সংকট
একটি খাদ্য নিরাপত্তা নমুনা পরিদর্শনের সময়, একটি তৃতীয় পক্ষের পরীক্ষার সংস্থা একই উদ্ভিজ্জ নমুনায় কীটনাশক অবশিষ্টাংশ সনাক্ত করার জন্য একটি ELISA পরীক্ষা পরিচালনা করেছিল। প্রাথমিক ফলাফল নেতিবাচক ছিল (সম্মত),যেহেতু পুনরায় পরীক্ষায় ইতিবাচক ফলাফল পাওয়া গেছে (অনুমোদিত সীমা অতিক্রম)উভয় পরীক্ষায় একই ব্যাচ রিএজেন্ট, একই অপারেটর এবং একই মাইক্রোপ্লেট রিডার ব্যবহার করা হয়েছিল; তবুও ফলাফলগুলি সম্পূর্ণরূপে পরস্পরবিরোধী ছিল। আরও তদন্তের পরে,সমস্যাটি মাইক্রোপ্লেট রিডার পাঠ প্রক্রিয়া চলাকালীন উদ্ভূত হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে: প্রাথমিক পরীক্ষার সময়, মাইক্রোপ্লেটটি পর্যাপ্তভাবে স্থির থাকতে দেওয়া হয়নি, যা কুয়োগুলিতে ক্ষুদ্র বায়ু বুদবুদ রেখেছিল,যার ফলে শোষণযোগ্যতা কম পড়া এবং ভুল নেতিবাচক ফলাফল পাওয়া যায়।.
এটি একটি বিচ্ছিন্ন ঘটনা নয়। এর উচ্চ সংবেদনশীলতা, শক্তিশালী নির্দিষ্টতা এবং ব্যবহারকারী-বান্ধব অপারেশনের কারণে, ক্লিনিকাল ডায়াগনস্টিক, খাদ্য নিরাপত্তা,পরিবেশগত পর্যবেক্ষণতবে, এলআইএসএ পদ্ধতিতে অনেকগুলি ধাপ এবং জটিল প্রভাবিতকারী কারণ জড়িত রয়েছে; যে কোনও পর্যায়ে যে কোনও বিচ্যুতি, লেপ, ব্লকিং, নমুনা যোগ করা,এবং ইনকিউবেশন থেকে ওয়াশিং পর্যন্ত, রঙ উন্নয়ন, সমাপ্তি, এবং পড়া অস্বাভাবিক ফলাফল হতে পারে। the accuracy and stability of the enzyme-linked immunosorbent assay reader's readings represent the final safeguard for ensuring the reliability of the final data—and yet this step is often the most easily overlooked.
একটি ভুল শোষণযোগ্যতা পাঠ্য একটি ইতিবাচক নমুনার একটি মিথ্যা-নেতিবাচক ব্যাখ্যা বা একটি নেতিবাচক নমুনার একটি মিথ্যা-নেতিবাচক ব্যাখ্যা হতে পারে। ক্লিনিকাল ডায়াগনস্টিকসে,মিথ্যা নেগেটিভ সঠিক চিকিত্সা বিলম্ব করতে পারে, যদিও মিথ্যা ইতিবাচক ফলাফলগুলি অপ্রয়োজনীয় চিকিত্সা হস্তক্ষেপের ফলে হতে পারে; খাদ্য নিরাপত্তা পরীক্ষায়, মিথ্যা নেতিবাচক ফলাফলগুলি নিম্নমানের পণ্যগুলিকে বাজারে প্রবেশ করতে দেয়,যেহেতু মিথ্যা ইতিবাচক তথ্য ব্যবসার জন্য অপ্রয়োজনীয় আর্থিক ক্ষতির কারণ হতে পারেELISA পরীক্ষার ফলাফলের পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা এবং নির্ভরযোগ্যতা আগের চেয়েও বেশি গুরুত্বপূর্ণ।
1.২ এলআইএসএ পরীক্ষার তথ্যের নির্ভরযোগ্যতা মূল্যায়নের জন্য চারটি মূল উপাদান
ELISA পরীক্ষার ফলাফলের সঠিকতা এবং পুনরুত্পাদনযোগ্যতা চারটি মূল মৌলিক উপাদানগুলির সিঙ্ক্রোনাস নিয়ন্ত্রণের উপর নির্ভর করেঃ
- রিএজেন্ট বিবেচনাঃ অ্যান্টিবডি/অ্যান্টিজেনের গুণমান এবং টাইটার, এনজাইম কনজুগ্যাটগুলির কার্যকারিতা, স্তরগুলির সতেজতা,এবং রেফারেন্স উপকরণগুলির নির্ভুলতা নির্ভরযোগ্য পরীক্ষার ফলাফলের ভিত্তি গঠন করেরিএজেন্ট ব্যাচের মধ্যে পার্থক্য, অনুপযুক্ত সঞ্চয়, বা মেয়াদ শেষ বা ব্যর্থ রিএজেন্ট সব ফলাফল বিচ্যুতি হতে পারে।
- অপারেশনাল ফ্যাক্টরঃ নমুনা যোগের নির্ভুলতা এবং ধারাবাহিকতা, ইনকিউবেশন তাপমাত্রা এবং সময়কালের সুনির্দিষ্ট নিয়ন্ত্রণ, ধোয়ার পর্যাপ্ততা,এবং রঙ উন্নয়ন সময় সঠিক ব্যবস্থাপনা পরীক্ষামূলক পুনরুত্পাদনযোগ্যতা নিশ্চিত করার জন্য সমালোচনামূলকম্যানুয়াল অপারেশনে পরিবর্তনগুলি ব্যাচ থেকে ব্যাচ এবং কূপ থেকে কূপের পরিবর্তনের প্রাথমিক উত্স।
- যন্ত্রপাতি বিবেচনাঃ অপটিক্যাল পথ স্থিতিশীলতা, তরঙ্গদৈর্ঘ্য নির্ভুলতা, পাঠ পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা,এবং মাইক্রোপ্লেট রিডার এর প্লেট কম্পন ফাংশন চূড়ান্ত তথ্য সঠিকতা নিশ্চিত করার জন্য গুরুত্বপূর্ণযদি যন্ত্রের কর্মক্ষমতা অনুপম হয় বা তার অবস্থা খারাপ হয়, তাহলে পূর্ববর্তী সমস্ত প্রচেষ্টা বৃথা যেতে পারে।
- পরিবেশগত কারণঃ পরীক্ষাগারের তাপমাত্রা, আর্দ্রতা, আলোর সংস্পর্শ এবং কম্পন বহিরাগত শর্ত যা পরীক্ষার স্থায়িত্বকে প্রভাবিত করে।পরিবেশগত ওঠানামা রিএজেন্টের কার্যকারিতা এবং প্রতিক্রিয়া হারের উপর প্রভাব ফেলতে পারে, যার ফলে ফলাফল ড্রিফট হয়।
MY-628 মাল্টিফাংশনাল ELISA বিশ্লেষক একটি আমদানিকৃত হ্যালোজেন আলোর উৎস, একটি 8-চ্যানেল উল্লম্ব অপটিক্যাল পাথ সিস্টেম, উচ্চ নির্ভুলতা ফিল্টার এবং বিশেষ বিশ্লেষণ সফটওয়্যার আছে,ELISA পরীক্ষার তথ্যের সঠিকতা এবং পুনরুত্পাদনযোগ্যতার জন্য যন্ত্রপাতি স্তরের দৃঢ় নিশ্চয়তা প্রদানমানসম্মত পরীক্ষাগার পদ্ধতি এবং মান নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাপনার সাথে একত্রিত হলে,এই যন্ত্রটি ল্যাবরেটরিগুলিকে "লট-টু-লট বৈচিত্র্যের" চ্যালেঞ্জ অতিক্রম করতে এবং একটি নির্ভরযোগ্য ইমিউনোলজিক্যাল অ্যাসেজ ডেটা সিস্টেম স্থাপন করতে সহায়তা করে.
II. মূল প্রযুক্তিগত বিবরণী এবং মান নিয়ন্ত্রণ ক্ষমতা ম্যাট্রিক্স
| ক্লাস | প্যারামিটার শব্দ | যোগ্যতা | গুণমান নিয়ন্ত্রণের গুরুত্ব |
|---|---|---|---|
| আলোর উৎস সিস্টেম | আলোর উৎস প্রকার | DC12V 22W আমদানিকৃত হ্যালোজেন ল্যাম্প | ধারাবাহিক স্পেকট্রাম, দীর্ঘ সেবা জীবন, এবং ন্যূনতম বেসলাইন ড্রাইভ |
| অপটিক্যাল পথের কাঠামো | ৮-চ্যানেল উল্লম্ব অপটিক্যাল পাথ সিস্টেম | সমস্ত কূপের মধ্যে অপটিক্যাল পথের কোনো বৈচিত্র্য দূর করার জন্য একটি সামঞ্জস্যপূর্ণ অপটিক্যাল পথ নিশ্চিত করা। | |
| তরঙ্গদৈর্ঘ্য কভারেজ | ৪০০ ~ ১০০০ এনএম | দৃশ্যমান আলো থেকে নিকটতম ইনফ্রারেড পর্যন্ত তরঙ্গদৈর্ঘ্য পরিসীমা জুড়ে, বিভিন্ন রঙ রেন্ডারিং সিস্টেমের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। | |
| ফিল্টারিং সিস্টেম | স্ট্যান্ডার্ড ফিল্টার কিট | 405,450,492৬৩০ এনএম | টিএমবি, ওপিডি এবং পিএনপির মতো মূলধারার রঙিন উপাদানগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। |
| ফিল্টার ক্ষমতা | ১৫ টি পর্যন্ত টুকরো লোড করা যায়। | বিভিন্ন প্রকল্প পরীক্ষার প্রয়োজনীয়তা পূরণের জন্য নমনীয় স্কেলযোগ্যতা | |
| নির্বাচিত তরঙ্গদৈর্ঘ্য | অন্যান্য তরঙ্গদৈর্ঘ্য ঐচ্ছিক আনুষাঙ্গিক হিসাবে উপলব্ধ। | বিশেষায়িত রিএজেন্টের জন্য কাস্টমাইজড টেস্টিং সমাধান | |
| সনাক্তকরণ কর্মক্ষমতা | রিডিং রেঞ্জ | ০ ~ ৪,০০০ এবস | বিস্তৃত রৈখিক পরিসীমা উচ্চ এবং নিম্ন ঘনত্ব উভয় স্তরে নমুনা সঠিকভাবে সনাক্ত করতে সক্ষম করে। |
| রেজোলিউশন অনুপাত | 0.001 Abs | উচ্চ রেজোলিউশন এমনকি দুর্বল সংকেতগুলিও সঠিকভাবে ধরা সম্ভব করে। | |
| ত্রুটি নির্দেশ করে | ≤ ±0.01 Abs | সঠিক পাঠ্য, নির্ভরযোগ্য ফলাফল | |
| স্থিতিশীলতা | ≤ ± 0.003 Abs | সর্বনিম্ন দীর্ঘমেয়াদী রিডিং ড্রাইভ এবং চমৎকার ব্যাচ-টু-বেচ ধারাবাহিকতা | |
| পুনরাবৃত্তি | ≤ ০.৩% | একক প্লেট পরিমাপের পুনরাবৃত্তিযোগ্যতা ন্যূনতম, এবং গর্তগুলির মধ্যে ধারাবাহিকতা উচ্চ। | |
| কম্পন প্লেট ফাংশন | প্লেটের কম্পনের গতি | স্তর ৩ ∙ সামঞ্জস্যযোগ্য | রিএজেন্টের প্রয়োজনীয়তা অনুযায়ী উপযুক্ত মিশ্রণের তীব্রতা নির্বাচন করুন। |
| প্লেট কম্পন সময় | ০২৫৫ সেকেন্ড (নিয়মিত) | মিশ্রণের সময়টির সঠিক নিয়ন্ত্রণ একটি নিখুঁত এবং অভিন্ন প্রতিক্রিয়া নিশ্চিত করে। | |
| অপারেশন প্রদর্শন | প্রদর্শন পর্দা | ৭ ইঞ্চি রঙিন এলসিডি স্ক্রিন | সম্পূর্ণ প্যানেলের ডেটা এবং অপারেশন ইন্টারফেসের স্পষ্ট প্রদর্শন |
| বোর্ডের স্থান নির্ধারণের পদ্ধতি | ভিজ্যুয়াল বোর্ড লেআউট | নমুনা / স্ট্যান্ডার্ড / ফাঁকা লেআউট কনফিগার করার জন্য স্বজ্ঞাত ইন্টারফেস, সেটআপ ত্রুটি হ্রাস। | |
| অপারেশন মোড | টাচ স্ক্রিন অপারেশন | সহজ এবং স্বজ্ঞাত ∙ অপারেশনাল বাধা কমিয়ে আনা। | |
| তথ্য পরিচালনা | প্রোগ্রাম স্টোর | ৫০০ প্রোগ্রাম সেট | একাধিক পরীক্ষার আইটেমগুলির জন্য পূর্বনির্ধারিত পরামিতিগুলি ব্যবহার করা সহজ। |
| ফলাফল সংরক্ষণ | 100,000 নমুনা ফলাফল | উচ্চ ক্ষমতাসম্পন্ন ঐতিহাসিক তথ্য সংরক্ষণ, যা ট্র্যাকযোগ্যতা এবং পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণকে সহজতর করে | |
| গণনার মোড | শোষণ, রৈখিকতা, লগারিদমিক স্কেল, বর্গক্ষেত্র, ঘনক্ষেত্র, শতাংশ শোষণ √ লগারিদমিক ঘনত্ব, স্প্লাইন ফাংশন, বাধা হার | বিভিন্ন প্রকল্পের স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখার বৈশিষ্ট্যগুলিকে সামঞ্জস্য করার জন্য 8 টি ফিটিং মোড | |
| ওয়ার্কস্টেশন সফটওয়্যার | পেশাদার বিশ্লেষণ সফটওয়্যার | জটিল বিশ্লেষণগত প্রয়োজনীয়তা পূরণের জন্য শক্তিশালী ডেটা প্রসেসিং ক্ষমতা | |
| বিশেষায়িত মডিউল | ইনহিবিশন রেট পরিমাপ | দমন হার পরিমাপ মডিউল কনফিগার করুন | বিশেষভাবে কৃষি এবং খাদ্য নিরাপত্তা দ্রুত সনাক্তকরণ অ্যাপ্লিকেশন জন্য ডিজাইন করা। |
| পাওয়ার সাপ্লাই ডিজাইন | পাওয়ার সাপ্লাই মোড | পাওয়ার অ্যাডাপ্টার | সুরক্ষা বিচ্ছিন্নতা বিদ্যুৎ সরবরাহের হস্তক্ষেপ হ্রাস করে |
| ইনপুট ভোল্টেজ | এসি 100 ~ 240V,50Hz | ব্রড ভোল্টেজ সামঞ্জস্য ️ সব অঞ্চলে ব্যবহারের জন্য উপযুক্ত। | |
| শারীরিক পরামিতি | নেট ওজন | প্রায় ৫ কেজি | হালকা ও কমপ্যাক্ট, যা সরানো এবং সঞ্চয় করা সহজ করে তোলে। |
| আকার | 400 ((L) × 260 ((W) × 200 ((H) মিমি | কমপ্যাক্ট ডিজাইন, ল্যাবরেটরি স্পেস সংরক্ষণ |
III. আট ধাপের স্ট্যান্ডার্ডাইজড ELISA সনাক্তকরণ এবং পাঠ পদ্ধতি
ধাপ ১ঃ পরীক্ষামূলক প্রস্তুতি এবং রিএজেন্ট ভারসাম্য
- 30 মিনিট আগে কিটটি রেফ্রিজারেটর থেকে বের করে নিন এবং এটিকে ঘরের তাপমাত্রায় ভারসাম্য বজায় রাখতে দিন যাতে রিএজেন্টের তাপমাত্রা পরীক্ষাগারের তাপমাত্রার সাথে মেলে।
- রিএজেন্টগুলির মেয়াদ শেষ হওয়ার তারিখ পরীক্ষা করুন এবং নিশ্চিত করুন যে সমস্ত উপাদান যেমন এনজাইম কনজুগ্যাট, সাবস্ট্র্যাট এবং শেষ সমাধানগুলি ভাল অবস্থায় রয়েছে।
- পরিষ্কারের দ্রবণ প্রস্তুত করুন; নির্দেশাবলী অনুযায়ী ঘনীভূত পরিষ্কারের দ্রবণ দ্রবীভূত করুন।
- প্রয়োজনীয় খরচ প্রস্তুত করুনঃ পাইপেট, টিপস, 96-পুল প্লেট, টাইমার, ইত্যাদি।
- মাইক্রোপ্লেট রিডার চালু করুন এবং আলোর উৎস এবং অপটিক্যাল পাথ সিস্টেম স্থিতিশীল করার জন্য এটি 15-30 মিনিটের জন্য প্রিহিট করার অনুমতি দিন।
গুণমান নিয়ন্ত্রণের মূল পয়েন্টগুলিঃ সম্পূর্ণরূপে ভারসাম্যহীন রিএজেন্টগুলির ব্যর্থতা অসঙ্গতিপূর্ণ প্রতিক্রিয়া হারের দিকে পরিচালিত করতে পারে, যা ব্যাচ থেকে ব্যাচে পরিবর্তনশীলতার একটি সাধারণ কারণ।ELISA রিডারের অপর্যাপ্ত প্রাক-গরমকরণ প্রাথমিক রিডিং ড্রাইভের কারণ হতে পারে, যার ফলে পরিমাপের নির্ভুলতা প্রভাবিত হয়।
ধাপ ২ঃ ELISA পাঠকের স্বয়ংক্রিয় পরীক্ষা এবং কার্যকারিতা যাচাইকরণ
- মাইক্রোপ্লেট রিডার চালু করুন এবং যন্ত্রটি তার স্ব-পরীক্ষা সম্পন্ন করার জন্য অপেক্ষা করুন।
- আলোর উত্সের অবস্থা পরীক্ষা করুন এবং নিশ্চিত করুন যে হালোজেন ল্যাম্পটি সঠিকভাবে কাজ করছে।
- একটি ফাঁকা প্লেট বা একটি ক্যালিব্রেশন প্লেট ব্যবহার করে একটি অন্তর্বর্তীকালীন যাচাইকরণ সম্পাদন করুন যা নিশ্চিত করে যে পাঠ্যগুলি স্বাভাবিক পরিসরের মধ্যে রয়েছে।
- ফিল্টার হুইলটি সুচারুভাবে ঘুরছে কিনা এবং তরঙ্গদৈর্ঘ্য সুইচিং সঠিকভাবে কাজ করছে কিনা তা পরীক্ষা করুন।
- পরীক্ষা করুন যে টাচস্ক্রিন এবং সফটওয়্যার স্বাভাবিকভাবে কাজ করছে, কোন ত্রুটি বার্তা প্রদর্শিত হচ্ছে না।
গুণমান নিয়ন্ত্রণের মূল পয়েন্টঃ প্রতিটি সিস্টেম স্টার্টআপের পরে একটি পারফরম্যান্স যাচাইকরণ সম্পাদন করুন; এটি ডেটা নির্ভুলতা নিশ্চিত করার জন্য একটি পূর্বশর্ত।সপ্তাহে একবার একটি স্ট্যান্ডার্ড অ্যাবসর্বেন্স রেফারেন্স প্লেট ব্যবহার করে একটি ব্যাপক পর্যায়ক্রমিক যাচাইকরণ করার পরামর্শ দেওয়া হয়.
ধাপ ৩ঃ নমুনা যোগ এবং ইনকিউবেশন
- পরীক্ষামূলক প্রোটোকল অনুসারে প্লেটটি সাজানঃ ফাঁকা কূপ, স্ট্যান্ডার্ড কূপ, নিয়ন্ত্রণ কূপ এবং নমুনা কূপ।
- কভারিং অ্যান্টিবডি বা অ্যান্টিজেন সঠিকভাবে যোগ করুন (যেমন, একটি uncoated প্লেট ব্যবহার করার সময়) ।
- স্ট্যান্ডার্ড, কন্ট্রোল নমুনা এবং পরীক্ষার নমুনা ক্রম অনুসারে যোগ করুন; প্রতিটি কূপে যোগ করা ভলিউমটি সামঞ্জস্যপূর্ণ কিনা তা নিশ্চিত করুন।
- এনজাইম কনজগ্যাট যোগ করুন এবং ভালভাবে মিশ্রিত করার জন্য আস্তে আস্তে ঝাঁকুন।
- সিলিং ফিল্মটি প্রয়োগ করুন এবং নমুনাটি 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেটরে নির্দিষ্ট ইনকিউবেশন সময়ের জন্য রাখুন।
গুণমান নিয়ন্ত্রণের মূল পয়েন্টগুলিঃ নমুনা যোগ করা হল ELISA পদ্ধতিতে ত্রুটির জন্য সর্বাধিক সম্ভাব্য পদক্ষেপ। ক্রস-দূষণ প্রতিরোধের জন্য ক্যালিব্রেটেড পাইপেট ব্যবহার করুন এবং পাইপেট টিপস প্রতিস্থাপন করুন।প্রথমে ভরাট কূপগুলিতে দীর্ঘ প্রতিক্রিয়া সময় এড়াতে একটি ধ্রুবক নমুনা যোগের গতি বজায় রাখুন.
ধাপ ৪ঃ থালা ধোয়া
- ইনকিউবেশন শেষ হলে, কূপ থেকে তরলটি সরিয়ে ফেলুন।
- ওয়াশিং সলিউশন যোগ করুন, এটি 30 ¢ 60 সেকেন্ডের জন্য দাঁড়ানো যাক, তারপর বাতিল করুন।
- ধোয়া ৩/৫ বার পুনরাবৃত্তি করুন (ইনস্ট্রাকশন ম্যানুয়াল অনুযায়ী)
- সর্বশেষ ধোয়ার পর, পোরগুলিতে কোনও অবশিষ্ট তরল না থাকার জন্য, শোষণকারী কাগজে নমুনাটি ট্যাপ শুকিয়ে ফেলুন।
গুণমান নিয়ন্ত্রণের মূল পয়েন্টগুলিঃ অপর্যাপ্ত ধোয়ার ফলে অ-নির্দিষ্ট বাঁধন বৃদ্ধি, উচ্চতর ব্যাকগ্রাউন্ড স্তর এবং উচ্চতর পরীক্ষার ফলাফল হতে পারে;অত্যধিক ধোয়ার ফলে নির্দিষ্ট আবদ্ধতা এলুটেড হতে পারেশুকানোর সময় কূপের নীচে স্ক্র্যাচ করা এড়িয়ে চলুন।
৫ম ধাপঃ রঙের বিকাশের প্রতিক্রিয়া
- প্রতিটি কূপে সাবস্ট্র্যাট সলিউশন (যেমন, টিএমবি) যোগ করুন; পরিমাণ এবং যোগের ক্রমানুসারে নমুনা লোডিংয়ের জন্য ব্যবহৃতগুলির সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ হবে।
- মিশ্রণের জন্য নরম ঝাঁকুনি; একটি মাইক্রোপ্লেট রিডার (নিম্ন গতি, স্বল্প সময়কাল) এর প্লেট ঝাঁকুনি ফাংশন ব্যবহার করা যেতে পারে।
- অন্ধকারে ইনকিউবেট করুন; নির্দিষ্ট সময়ের জন্য রঙ তৈরি করুন (সাধারণত ১০-১৫ মিনিট) ।
- রঙের বিকাশ পর্যবেক্ষণ করুনঃ ধনাত্মক কূপগুলি একটি স্বতন্ত্র নীল রঙ প্রদর্শন করা উচিত।
গুণমান নিয়ন্ত্রণের মূল পয়েন্টঃ রঙের বিকাশের সময় ফলাফলের উপর উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলে এবং কঠোরভাবে নিয়ন্ত্রণ করা উচিত।এটি একটি টাইমার ব্যবহার করার পরামর্শ দেওয়া হয় ✓ প্রথম স্তরটি পুঁজীতে যুক্ত হওয়ার মুহুর্ত থেকে টাইমিং শুরু, এবং অবিলম্বে স্টপ সমাধান যোগ করুন সময় ব্যবধানের মেয়াদ শেষ হওয়ার পরে।
ধাপ ৬ঃ প্রতিক্রিয়া শেষ করুন এবং একটি যান্ত্রিক শেকার ব্যবহার করে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করুন।
- প্রতিটি কূপের মধ্যে সমাপ্তি সমাধান (যেমন, ২ এম এইচ২এসও৪) যোগ করা হবে।
- টার্মিনেশন সলিউশন যোগ করার পর, রঙ নীল থেকে হলুদ (TMB সিস্টেম) পরিবর্তন হয়।
- মাইক্রোপ্লেট রিডারের প্লেট ঝাঁকুনি ফাংশনটি ব্যবহার করে প্রতিটি কূপে তরলটি পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে মিশ্রিত করার জন্য একটি উপযুক্ত গতি এবং সময় নির্বাচন করুন (সাধারণত মাঝারি গতি, 10 ¢ 30 সেকেন্ড) ।
- মিশ্রণটি ১/২ মিনিট রেখে দিন; একবার বুদবুদগুলি অদৃশ্য হয়ে গেলে, রিডিং নিতে প্রস্তুত হন।
গুণমান নিয়ন্ত্রণের মূল পয়েন্টঃ সমাপ্তি সমাধানের সংযোজন ক্রম এবং ব্যবধানগুলি স্তরটির জন্য ব্যবহৃতগুলির সাথে মিলতে হবে,সব কূপের মধ্যে রঙের বিকাশের সময় একই হয় তা নিশ্চিত করা. প্লেটটি কাঁপানোর পরে, এটিকে ডিফোমিংয়ের জন্য দাঁড়াতে দেওয়া উচিত; বুদবুদগুলি শোষণযোগ্যতা রিডিংয়ে মারাত্মকভাবে হস্তক্ষেপ করতে পারে, যার ফলে ফলাফলগুলিকে কম মূল্যায়ন করা হয়।
ধাপ ৭ঃ শোষণের পরিমাণ
- মাইক্রোপ্লেটটি পরীক্ষা করুন যাতে কোনও বুদবুদ, তরল ফুটো বা কূপের বাইরে কোনও তরল নেই।
- মাইক্রোপ্লেটটি সঠিকভাবে মাইক্রোপ্লেট রিডারটির মাইক্রোপ্লেট হোল্ডারে রাখুন, ওরিয়েন্টেশনে মনোযোগ দিন (এ 1 ওয়েল অবস্থান) ।
- টাচস্ক্রিনে উপযুক্ত সনাক্তকরণ প্রোগ্রাম নির্বাচন করুন এবং নিশ্চিত করুন যে তরঙ্গদৈর্ঘ্যের সেটিংস সঠিক (প্রধান তরঙ্গদৈর্ঘ্য + রেফারেন্স তরঙ্গদৈর্ঘ্য) ।
- নিশ্চিত করুন যে বোর্ড লেআউট কনফিগারেশন প্রকৃত বোর্ড লেআউটের সাথে মেলে।
- প্রাথমিক পাঠ্যঃ যন্ত্রটি স্বয়ংক্রিয়ভাবে পুরো প্লেট শোষণ পরিমাপ করে।
- রিডিং শেষ হলে, কোনও অস্বাভাবিক মান (যেমন বুদবুদ দ্বারা সৃষ্ট অস্বাভাবিকভাবে কম মান) পরীক্ষা করার জন্য কাঁচা ডেটা পর্যালোচনা করুন।
গুণমান নিয়ন্ত্রণের মূল পয়েন্টঃ আরও রঙের পরিবর্তন রোধ করার জন্য পদ্ধতিটি শেষ হওয়ার 5 মিনিটের মধ্যে পাঠ করা উচিত। একটি রেফারেন্স তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করে (যেমন,630 nm) ভাল নীচে scratches বা দাগ দ্বারা সৃষ্ট হস্তক্ষেপ নির্মূল করতে পারেন. অস্বাভাবিক রিডিং দেখানো কোন কূপ চিহ্নিত বা পুনরায় পরিমাপ করা উচিত।
ধাপ ৮ঃ তথ্য প্রক্রিয়াকরণ এবং ফলাফল পর্যালোচনা
- সফটওয়্যারটি স্বয়ংক্রিয়ভাবে ফাঁকা গড়, স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ এবং নমুনার ঘনত্ব গণনা করে।
- স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা বৈধকরণঃ সংশ্লিষ্টতা সহগ R2 ≥ 0.99 হওয়া উচিত (বা কিট স্পেসিফিকেশন মেনে চলতে হবে); গণনা করা ঘনত্ব বিচ্যুতি একটি গ্রহণযোগ্য পরিসরের মধ্যে থাকা উচিত।
- মান নিয়ন্ত্রণের নমুনার অডিটঃ মান নিয়ন্ত্রণের নমুনার পরিমাপ মান লক্ষ্যমাত্রার ± 2 এসডি এর মধ্যে থাকা উচিত;কমপক্ষে দুই স্তরের মান নিয়ন্ত্রণের নমুনা একযোগে নিয়ন্ত্রিত হতে হবে.
- নমুনার ফলাফল পর্যালোচনা করুনঃ স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা পরিসরের বাইরে যে কোনও নমুনা পরীক্ষা করুন (এগুলি হ্রাস করা উচিত এবং আবার বিশ্লেষণ করা উচিত) ।
- ফলাফলের বৈধতা যাচাইকরণঃ স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ এবং গুণমান নিয়ন্ত্রণ পরীক্ষা উভয়ই প্রয়োজনীয়তা পূরণ করেছে; এই লটের ফলাফল বৈধ।
- তথ্য সংরক্ষণ করুন, প্রতিবেদন মুদ্রণ করুন, সাইন ইন করুন এবং সংরক্ষণাগার করুন
গুণমান নিয়ন্ত্রণের মূল পয়েন্টঃ পরীক্ষার প্রতিটি ব্যাচে গুণমান নিয়ন্ত্রণের নমুনা অন্তর্ভুক্ত করতে হবে; যদি গুণমান নিয়ন্ত্রণের ফলাফলগুলি প্রয়োজনীয়তা পূরণ না করে,ফলাফলের পুরো ব্যাচটি অবৈধ বলে বিবেচিত হবে এবং তা রিপোর্ট করা যাবে না।স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ফিটিং পদ্ধতিটি পরীক্ষার বৈশিষ্ট্যগুলির উপর ভিত্তি করে বেছে নেওয়া উচিত; সমস্ত পরীক্ষাগুলি রৈখিক রিগ্রেশনের জন্য উপযুক্ত নয়।
IV. শোষণ পরিমাপের নির্ভুলতা প্রভাবিত সাতটি মূল কারণ
1. আলোর উৎস স্থিতিশীলতা এবং জীবনকাল
হ্যালোজেন ল্যাম্পের আলোক তীব্রতা ব্যবহারের সাথে সাথে ধীরে ধীরে হ্রাস পায় এবং ভোল্টেজ ওঠানামা আলোর তীব্রতার পরিবর্তনের কারণও হতে পারে।আলোর উৎস এই অস্থিরতা সরাসরি শোষণ পরিমাপ ড্রাইভ নেতৃত্ব দেয় এবং ব্যাচ থেকে ব্যাচ বৈচিত্র একটি গুরুত্বপূর্ণ উৎস প্রতিনিধিত্ব করে.
প্রভাবের মাত্রাঃ আলোর উৎস বৃদ্ধির ফলে ৫% থেকে ১৫% পর্যন্ত পাঠ্য ড্রিফট হতে পারে।
নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাঃ উচ্চমানের আমদানিকৃত হ্যালোজেন ল্যাম্প ব্যবহার করুন যাতে স্থিতিশীল আলোর তীব্রতা নিশ্চিত হয়; প্রতিটি ব্যবহারের আগে ডিভাইসটি 15-30 মিনিটের জন্য প্রিহিট করুন;আলোর উৎস স্থিতিশীল হওয়ার পরেই পরিমাপ করা হবেএকটি স্ট্যান্ডার্ড শোষণ রেফারেন্স প্লেট ব্যবহার করে সিস্টেমটি পর্যায়ক্রমে যাচাই করুন; যখন তার সেবা জীবন শেষ হয়ে যায় তখন হালকা উত্সটি অবিলম্বে প্রতিস্থাপন করুন।
2. অপটিক্যাল পথের ধারাবাহিকতা এবং inter-pupil বৈচিত্র
মাল্টি-চ্যানেল মাইক্রোপ্লেট রিডারের প্রতিটি চ্যানেলের অপটিক্যাল পাথের বৈশিষ্ট্যগুলি পুরোপুরি একরকম হতে পারে না; যদি অপটিক্যাল পাথের নকশাটি অপ্টিমাল না হয়,এটি বিভিন্ন কূপের মধ্যে একই সমাধানের জন্য ভিন্ন পাঠের ফলাফল হতে পারেআট-চ্যানেল উল্লম্ব অপটিক্যাল পথ নকশা সমস্ত কূপ জুড়ে অপটিক্যাল পথের ধারাবাহিকতা সর্বাধিক করে তোলে।
প্রভাবের মাত্রাঃ অপটিক্যাল পথের পরিবর্তনগুলি হোলের মধ্যে CV কে 1% ছাড়িয়ে যেতে পারে।
নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাঃ একটি উল্লম্ব অপটিক্যাল পথ নকশা সঙ্গে একটি ELISA পাঠক ব্যবহার করুন; নিয়মিত interwell সামঞ্জস্য পরীক্ষা সঞ্চালন; সমালোচনামূলক পরীক্ষার জন্য,ইনট্রা-পুল পুনরাবৃত্তি পরিচালনা এবং গড় মান গণনা; কূপের তল অবস্থার পরিবর্তনের জন্য রেফারেন্স তরঙ্গদৈর্ঘ্য ব্যবহার করুন।
3. ফিল্টার তরঙ্গদৈর্ঘ্যের নির্ভুলতা
একটি ফিল্টারের কেন্দ্রীয় তরঙ্গদৈর্ঘ্য এবং অর্ধেক প্রস্থ সরাসরি সনাক্তকরণের স্বতন্ত্রতা এবং সংবেদনশীলতাকে প্রভাবিত করে।তরঙ্গদৈর্ঘ্য বিচ্যুতি আসল মান থেকে শোষণ পাঠ্য বিচ্যুত হতে পারেবিভিন্ন রেজেন্টের জন্য সর্বোত্তম তরঙ্গদৈর্ঘ্য সামান্য পরিবর্তিত হতে পারে।
প্রভাবের মাত্রাঃ 5 এনএম এর তরঙ্গদৈর্ঘ্যের পরিবর্তনের ফলে 3%~10% এর পাঠ্য বিচ্যুতি হতে পারে।
নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাঃ উচ্চমানের হস্তক্ষেপ ফিল্টার ব্যবহার করুন; নিয়মিত তরঙ্গদৈর্ঘ্য ক্যালিব্রেশন সম্পাদন করুন; রিএজেন্ট নির্দেশাবলী অনুযায়ী সঠিক তরঙ্গদৈর্ঘ্য নির্বাচন করুন;স্ট্যান্ডার্ড কনফিগারেশনটি 405/450/492/630 এনএম তরঙ্গদৈর্ঘ্যের প্রধান রঙের সিস্টেমগুলিকে কভার করেবিশেষায়িত অ্যাপ্লিকেশনের জন্য, উপযুক্ত অতিরিক্ত ফিল্টার নির্বাচন করুন।
4. মাইক্রোপ্লেট গুণমান এবং ভাল-তল অবস্থা
মাইক্রোপ্লেট পণ্যগুলির বিভিন্ন ব্র্যান্ড এবং ব্যাচের মধ্যে বিভিন্ন আলোর ট্রান্সমিট্যান্সের মাত্রা প্রদর্শিত হতে পারে।বা ফোয়ারা তল উপর তরল অবশিষ্টাংশ হালকা সংক্রমণ বাধা দিতে পারে, যা অস্বাভাবিক রিডিং মানের দিকে পরিচালিত করে। কূপগুলির প্রান্তে বাষ্পীভবন প্রভাব (কুণ্ড প্রভাব) পরীক্ষার ফলাফলগুলিকেও প্রভাবিত করতে পারে।
প্রভাবের মাত্রাঃ ইন্টার-বোর্ড বৈচিত্র্য 5% থেকে 10% পর্যন্ত হতে পারে; দূষিত গর্ত অস্বাভাবিকভাবে উচ্চ রিডিং হতে পারে।
নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাঃ উচ্চ মানের, উচ্চ স্বচ্ছতা ELISA প্লেট ব্যবহার করুন; প্রতিটি পরীক্ষার জন্য একই ব্যাচের প্লেট ব্যবহার করুন; অপারেশন চলাকালীন কূপের নীচে স্পর্শ করা এড়িয়ে চলুন;চেক করুন এবং পড়া আগে ভাল নীচে পরিষ্কার; যখন গুরুত্বপূর্ণ প্রান্ত প্রভাব উপস্থিত থাকে, প্রান্ত কূপ ব্যবহার বা humidification চিকিত্সা প্রয়োগ এড়াতে।
5. বুদবুদ এবং তরল সমতা
নমুনা যোগ করার সময় বা প্লেট ঝাঁকুনির সময় তৈরি বুদবুদগুলি শোষণের পরিমাপকে মারাত্মকভাবে হস্তক্ষেপ করতে পারে; যেহেতু আলো এই বুদবুদগুলির মধ্য দিয়ে স্বাভাবিকভাবে যেতে পারে না,এর ফলে অস্বাভাবিকভাবে কম রিডিং হয়একই কূপের মধ্যে তরল মিশ্রণের অসমতা ঘনত্বের ভারসাম্যহীন বিতরণ হতে পারে।
প্রভাবঃ বুদবুদগুলি একক গর্তের পাঠ্যকে 20% এরও বেশি হ্রাস করতে পারে বা এমনকি মিথ্যা নেতিবাচক ফলাফলের দিকে পরিচালিত করতে পারে।
নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাঃ নমুনা যোগ করার সময় বুদবুদ সৃষ্টি এড়ানো; বুদবুদ সৃষ্টির কারণ হতে পারে এমন শক্তিশালী কম্পন রোধ করার জন্য একটি উপযুক্ত কম্পন গতি বজায় রাখা;মিশ্রণটি 1 ¢ 2 মিনিটের জন্য অপেক্ষা করতে দিন যাতে বুদবুদগুলি নির্মূল করতে পরিমাপটি পড়তে পারে; যদি বুদবুদ পাওয়া যায়, তাহলে একটি সুই বা সেন্ট্রিফুগ ব্যবহার করে সেগুলো সরিয়ে ফেলুন; অস্বাভাবিকভাবে কম রিডিং সহ কূপগুলির জন্য, বুদবুদের উপস্থিতি পরীক্ষা করুন।
6. পরিবেশে তাপমাত্রা এবং আর্দ্রতা
পরিবেশে তাপমাত্রা উভয় প্রতিক্রিয়া হার এবং এনজাইম কার্যকলাপ, পাশাপাশি ইলেকট্রনিক উপাদানগুলির স্থিতিশীলতা প্রভাবিত করে। অত্যধিক আর্দ্রতা অপটিক্যাল লেন্সগুলিতে ঘনীভবন সৃষ্টি করতে পারে,অপটিক্যাল পথের ব্যাঘাত ঘটায়বিপরীতে, অপর্যাপ্ত আর্দ্রতা স্ট্যাটিক বিদ্যুৎ উৎপন্ন করতে পারে, যা যন্ত্রের অপারেশনকে প্রতিকূলভাবে প্রভাবিত করে।
প্রভাবের মাত্রাঃ 5°C তাপমাত্রা ওঠানামা প্রতিক্রিয়া হারের 10%~20% পরিবর্তন করতে পারে।
নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থাঃ পরীক্ষাগারের তাপমাত্রা ২০-২৫ ডিগ্রি সেলসিয়াস এবং আপেক্ষিক আর্দ্রতা ৪০-৭০% এর মধ্যে বজায় রাখা; এয়ার কন্ডিশনার সিস্টেম থেকে যন্ত্রের দিকে সরাসরি বায়ু প্রবাহ এড়ানো;তাপ উত্স এবং সরাসরি সূর্যালোক থেকে সরঞ্জাম অবস্থান; ইনকিউবেটর ব্যবহার করুন; ঘরের তাপমাত্রায় ইনকিউবেটর ব্যবহার করবেন না।
7কম্পন এবং ইলেক্ট্রোম্যাগনেটিক হস্তক্ষেপ
বাহ্যিক কম্পনগুলি অপটিক্যাল পথের স্থিতিশীলতাকে প্রভাবিত করতে পারে, যা রিডিংয়ের ওঠানামা হতে পারে। শক্তিশালী ইলেকট্রোম্যাগনেটিক হস্তক্ষেপ ইলেকট্রনিক সিস্টেমের স্বাভাবিক অপারেশনকে ব্যাহত করতে পারে,যার ফলে ডেটা অস্বাভাবিকতা দেখা দেয়যন্ত্রটি একটি শক্তিশালী পরীক্ষাগার বেঞ্চে স্থাপন করা উচিত, কম্পনের উৎস যেমন সেন্ট্রিফুগ বা দোলকগুলির পাশাপাশি শক্তিশালী ইলেক্ট্রোম্যাগনেটিক সরঞ্জাম থেকে দূরে।
প্রভাবের মাত্রাঃ কম্পন রিডিং ফ্লুক্টোশন এবং হ্রাস পুনরাবৃত্তি হতে পারে।
অপারেশন সতর্কতাঃ যন্ত্রটি একটি স্থিতিশীল, সমতল পরীক্ষাগার বেঞ্চে রাখুন; এটি কম্পন উত্স এবং শক্তিশালী ইলেক্ট্রোম্যাগনেটিক সরঞ্জাম থেকে দূরে রাখুন;পাওয়ার সাপ্লাই ইন্টারফারেন্স কমাতে পাওয়ার অ্যাডাপ্টার ব্যবহার করুনযদি প্রয়োজন হয়, একটি নিয়ন্ত্রিত শক্তি সরবরাহ ব্যবহার করুন।
V. স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ ফিটিং মোড নির্বাচন গাইড
এমআই-৬২৮ এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট টেস্ট রিডারে আটটি অন্তর্নির্মিত গণনার মোড রয়েছে; বিভিন্ন সনাক্তকরণ টেস্টের জন্য,যথাযথ ফিটিং মোডটি ডোজ-রেসপন্স কার্ভের বৈশিষ্ট্যগুলির উপর ভিত্তি করে বেছে নেওয়া উচিত যাতে সর্বাধিক সঠিক ঘনত্ব গণনার ফলাফল পাওয়া যায়।.
| ফিটিং মোড | প্রযোজ্য দৃশ্য | বক্ররেখার বৈশিষ্ট্য | বিষয়গুলোতে মনোযোগ প্রয়োজন |
|---|---|---|---|
| শোষণ (সরাসরি পাঠ) | গুণগত সনাক্তকরণ, ইতিবাচক/নেতিবাচক নির্ধারণ, বাধা হার গণনা | কোন ঘনত্ব রূপান্তর প্রয়োজন হয় না; সরাসরি শোষণ তুলনা করুন। | "ইন" বা "ইয়াং" এর গুণগত নির্ধারণের প্রয়োজন যেখানে পরিমাণগত পরিমাপের প্রয়োজন ছাড়াই আইটেমগুলির জন্য উপযুক্ত। |
| রৈখিক সমীকরণ | একটি সংকীর্ণ ঘনত্ব পরিসীমা এবং একটি ভাল রৈখিক সম্পর্ক সঙ্গে প্রকল্প | y = ax + b ️ লিনিয়ার রিগ্রেশন | শুধুমাত্র রৈখিক পরিসরের মধ্যে সঠিক; এই পরিসরের বাইরে উল্লেখযোগ্য বিচ্যুতি ঘটে। |
| লোগারিথমিক সমীকরণ | আধা লোগারিথমিক কোঅর্ডিনেটে অনুকূল রৈখিকতার সাথে ইমিউনোসাইস | y = a·ln(x) + b | মাঝারি ঘনত্বের জন্য উপযুক্ত; উপরের বা নীচের প্রান্তে বিচ্যুতি ঘটতে পারে। |
| চতুর্ভুজ সমীকরণ | সামান্য বাঁকা স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা | y = ax2 + bx + c | সচেতন থাকুন যে প্যারাবোলার চরম মান থাকতে পারে; যুক্তিসঙ্গত পরিসরের বাইরে ফলাফলগুলি বিশ্বাস করা উচিত নয়। |
| ঘন ঘন সমীকরণ | জটিল বক্ররেখা বা স্পষ্ট বাঁক সঙ্গে প্রকল্প | y = ax3 + bx2 + cx + d | উচ্চ ফিটনেস, কিন্তু উল্লেখযোগ্য এক্সট্রপোলেশন ঝুঁকি; শুধুমাত্র স্ট্যান্ডার্ড পদার্থ পরিসীমা মধ্যে প্রযোজ্য। |
| শোষণের শতাংশ ∙ ঘনত্বের লোগারিদম | প্রতিযোগিতামূলক ELISA (যেমন, ছোট অণু সনাক্তকরণের জন্য) | বি/বি০% বনাম লোগ ((কনসেন্ট্রেশন), এস আকৃতির বক্ররেখা | একটি সাধারণ প্রতিযোগিতামূলক মূল্য নির্ধারণের মডেল ∙ ২০% ∙ ৮০% সংমিশ্রিত হার পরিসীমা সবচেয়ে সঠিক ফলাফল দেয়। |
| স্প্লিন ফাংশন | অসংখ্য স্ট্যান্ডার্ড পয়েন্ট এবং অনিয়মিত বক্ররেখাযুক্ত প্রকল্প | সমস্ত স্ট্যান্ডার্ড পয়েন্টের মধ্য দিয়ে যাওয়া সেগমেন্টয |

