Umfassender Leitfaden zur Wiederholbarkeit von Immunoassay-Daten und zur experimentellen Qualitätskontrolle für Mikroplattenleser

Vollständiger Leitfaden für die Wiederholbarkeit von Immunoassay-Daten und die experimentelle Qualitätskontrolle für den Mikroplattenleser

I. Warum die Wiederholbarkeit von ELISA-Analysen zu einer zentralen Herausforderung für die Glaubwürdigkeit von Labordaten geworden ist

1.1 Eine Erkennungskrise, die durch ein falsch negatives Ergebnis ausgelöst wird

Bei einer Inspektion der Probenahme für Lebensmittelsicherheit führte eine Prüfstelle eines Drittanbieters eine ELISA-Analyse durch, um Pestizidrückstände auf derselben Gemüseprobe nachzuweisen.Die erneute Prüfung ergab ein positives Ergebnis (Überschreitung der zulässigen Grenzwerte)Beide Tests verwendeten die gleiche Reagenzgruppe, denselben Bediener und denselben Mikroplattenleser, doch die Ergebnisse waren völlig widersprüchlich.Das Problem wurde als während des Microplate-Reader-Leseprozesses identifiziert.: während der ersten Prüfung wurde die Mikroplatte nicht ausreichend stillstehen lassen, wodurch winzige Luftblasen in den Bohrungen verbleiben.die zu einer unterschätzten Absorptionsmessung und zu einem falschen negativen Ergebnis führten.

Dies ist kein Einzelfall. Aufgrund seiner hohen Empfindlichkeit, hohen Spezifität und benutzerfreundlichen Bedienung wurden ELISA-Assays in der klinischen Diagnostik, der Lebensmittelsicherheit, derUmweltüberwachungDie ELISA-Verfahren beinhalten jedoch zahlreiche Schritte und komplexe Einflussfaktoren.und von der Inkubation bis zum WaschenBei der Verarbeitung von Farben, der Entwicklung, der Beendigung und der Lektüre können abnormale Ergebnisse entstehen. the accuracy and stability of the enzyme-linked immunosorbent assay reader's readings represent the final safeguard for ensuring the reliability of the final data—and yet this step is often the most easily overlooked.

Eine ungenaue Absorptionsmessung kann zu einer falsch-negativen Interpretation einer positiven Probe oder einer falsch-positiven Interpretation einer negativen Probe führen.Falsch-Negative können eine angemessene Behandlung verzögern, während falsche Positive zu unnötigen medizinischen Eingriffen führen können; bei der Lebensmittelsicherheitstestung können falsche Negative dazu führen, dass minderwertige Produkte auf den Markt kommen,Falschpositive können zu unzumutbaren finanziellen Verlusten für Unternehmen führen.Die Wiederholbarkeit und Zuverlässigkeit der ELISA-Ergebnisse ist heute wichtiger denn je.

1.2 Vier Grundprinzipien für die Bewertung der Zuverlässigkeit der ELISA-Prüfdaten

Die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der ELISA-Ergebnisse hängt von der synergistischen Kontrolle von vier wesentlichen Kernelementen ab:

• Reagenzüberlegungen: Qualität und Titer von Antikörpern/Antigenen, Aktivität von Enzymkonjugaten, Frische der Substrate,und die Genauigkeit der Referenzmaterialien bilden die Grundlage für zuverlässige AnalyseergebnisseAbweichungen zwischen den Reagenzchargen, unsachgemäße Lagerung oder abgelaufene oder ausfallende Reagenzien können zu Ergebnisunterschieden führen.
• Betriebsfaktoren: Genauigkeit und Konsistenz der Probenerhöhung, präzise Kontrolle der Inkubationstemperatur und -dauer, angemessene Waschung,und das richtige Management der Farbenentwicklung Zeit sind entscheidend für die Sicherstellung der experimentellen ReproduzierbarkeitDie Variationen bei manuellen Arbeiten sind die Hauptquellen für die Variation von Charge zu Charge und von Brunnen zu Brunnen.
• Instrumentelle Überlegungen: Optische Stabilität, Wellenlängengenauigkeit, Wiederholgenauigkeit,und Plattenschüttelfunktion des Mikroplattenlesers sind entscheidend für die Gewährleistung der Genauigkeit der EnddatenWenn die Leistung des Geräts nicht optimal ist oder sein Zustand schlecht ist, können alle bisherigen Bemühungen vergeblich sein.
• Umweltfaktoren: Temperatur, Feuchtigkeit, Lichtbelastung und Vibrationen im Labor sind äußere Bedingungen, die die Stabilität des Experiments beeinflussen.Umweltschwankungen können die Reagenzaktivität und die Reaktionsgeschwindigkeit beeinflussen, was zu Ergebnisverschiebungen führt.

Der MY-628 Multifunktions-ELISA-Analysator verfügt über eine importierte Halogen-Lichtquelle, ein 8-Kanal-vertikal optisches Pfadsystem, hochpräzise Filter und spezielle Analyse-Software,Bereitstellung einer soliden Instrumentensicherung für die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der ELISA-AnalysedatenIn Kombination mit standardisierten Laborverfahren und QualitätskontrollmanagementDieses Instrument hilft den Laboratorien, die Herausforderung der "Batch-to-Batch-Variabilität" zu bewältigen und ein zuverlässiges Immunologische-Assay-Datensystem zu etablieren..

II. Kerntechnische Spezifikationen und Qualitätskontrolle

III. Achtstufiges standardisiertes ELISA-Erkennungs- und Ausleseverfahren

Schritt 1: Versuchsvorbereitung und Reagenzbalancierung

1. Das Kit wird 30 Minuten vorher aus dem Kühlschrank entfernt und bei Raumtemperatur ausgeglichen, so dass die Reagenztemperatur der Labortemperatur entspricht.
2. Überprüfen Sie das Verfallsdatum der Reagenzien und bestätigen Sie, dass alle Bestandteile, wie Enzymkonjugate, Substrate und Endlösungen, in gutem Zustand sind.
3. Bereiten Sie die Reinigungslösung vor; verdünnen Sie die konzentrierte Reinigungslösung nach den Anweisungen.
4. Bereiten Sie die erforderlichen Verbrauchsmaterialien vor: Pipetten, Spitzen, 96-Bohrplatten, Timer usw.
5. Schalten Sie den Mikroplattenleser ein und lassen Sie ihn 15-30 Minuten lang vorwärmen, um die Lichtquelle und das optische Wegsystem zu stabilisieren.

Wichtige Punkte der Qualitätskontrolle: Wenn Reagenzien nicht vollständig ausgeglichen werden, kann dies zu inkonsistenten Reaktionsgeschwindigkeiten führen, was eine häufige Ursache für Variation von Charge zu Charge ist.Eine unzureichende Vorwärmung des ELISA-Lesers kann zu einer ersten Abweichung der Messwerte führen., wodurch die Messgenauigkeit beeinträchtigt wird.

Schritt 2: Automatische Prüfung und Leistungsüberprüfung des ELISA-Lesers

1. Schalten Sie den Mikroplattenleser ein und warten Sie, bis das Gerät seinen Selbsttest abgeschlossen hat.
2. Überprüfen Sie den Zustand der Lichtquelle und bestätigen Sie, dass die Halogenlampe ordnungsgemäß funktioniert.
3. Es wird eine Zwischenüberprüfung anhand einer leeren Platte oder einer Kalibrierplatte durchgeführt, um zu bestätigen, dass die Messwerte innerhalb des Normalbereichs liegen.
4. Überprüfen Sie, ob das Filterrad reibungslos dreht und ob die Wellenlängenumstellung ordnungsgemäß funktioniert.
5. Überprüfen Sie, ob der Touchscreen und die Software normal funktionieren und keine Fehlermeldungen angezeigt werden.

Schlüsselpunkt der Qualitätskontrolle: Bei jedem Systemstart eine Leistungsüberprüfung durchführen; dies ist eine Voraussetzung für die Gewährleistung der Datengenauigkeit.Es wird empfohlen, einmal wöchentlich eine umfassende regelmäßige Überprüfung unter Verwendung einer Standard-Absorptionsreferenzplatte durchzuführen..

Schritt 3: Probezufuhr und Inkubation

1. Die Platte ist nach dem Versuchsprotokoll zu ordnen: leere Bohrungen, Standardbohrungen, Kontrollbohrungen und Probenbohrungen.
2. Der Beschichtungsantikörper oder das Antigen wird genau hinzugefügt (z. B. bei Verwendung einer nicht beschichteten Platte).
3. Die Standardprobe, die Kontrollprobe und die Prüfprobe werden in Reihenfolge hinzugefügt; sichergestellt wird, dass das Volumen, das jeder Bohrung zugefügt wird, konsistent ist.
4. Das Enzymkonjugat hinzufügen und sanft schütteln, um gut zu mischen.
5. Die Versiegelungsfolie wird aufgetragen und die Probe für die angegebene Inkubationszeit in einen 37°C-Inkubator gelegt.

Schlüsselpunkte der Qualitätskontrolle: Die Probenzugabe ist der Schritt mit dem größten Fehlerpotenzial in den ELISA-Verfahren.Beibehalten Sie eine gleichbleibende Probenzufüllgeschwindigkeit, um längere Reaktionszeiten in zuerst gefüllten Bohrungen zu vermeiden.

Schritt 4: Geschirrspülung

1. Nach Abschluss der Inkubation wird die Flüssigkeit aus den Brunnen entfernt.
2. Die Waschlösung wird hinzugefügt, für 30~60 Sekunden stehen gelassen und dann weggeworfen.
3. Wiederholen Sie das Waschen 3-5 Mal (wie in der Bedienungsanleitung angegeben)
4. Nach dem letzten Waschen wird die Probe auf absorbierendem Papier getrocknet, um sicherzustellen, dass keine Flüssigkeit in den Poren verbleibt.

Wichtige Punkte der Qualitätskontrolle: Unzureichendes Waschen kann zu einer erhöhten unspezifischen Bindung, erhöhten Hintergrundspiegeln und erhöhten Analyseergebnissen führen.Übermäßiges Waschen kann dazu führen, dass die spezifische Bindung gelutert wirdVermeiden Sie es, den Brunnenboden während des Trocknens zu kratzen.

Schritt 5: Reaktion auf die Farbentwicklung

1. Die Substratlösung (z. B. TMB) wird in jede Bohrung zugesetzt; die Menge und Reihenfolge der Zugabe müssen denen entsprechen, die für die Probenbelastung verwendet wurden.
2. Für das Mischen leicht schütteln; die Plattenschüttelfunktion auf einem Mikroplattenlesegerät (niedrige Geschwindigkeit, kurze Dauer) kann verwendet werden.
3. In der Dunkelheit brüten; die Farbe wird für die angegebene Zeit (normalerweise 10~15 Minuten) entwickelt.
4. Beobachten Sie die Farbentwicklung: Die positiven Bohrungen sollten eine deutliche blaue Farbe aufweisen.

Qualitätskontrolle Schlüsselpunkt: Die Zeit der Farbentwicklung hat erhebliche Auswirkungen auf die Ergebnisse und muss streng kontrolliert werden.Es wird empfohlen, einen Timer zu verwenden, der mit dem Zeitpunkt anfängt, zu dem das erste Substrat in den Brunnen aufgenommen wird.Das Substrat sollte in einer lichtsicheren Umgebung aufbewahrt werden, um eine vorzeitige Farbentwicklung zu verhindern.

Schritt 6: Die Reaktion wird beendet und mit einem mechanischen Shaker gründlich gemischt.

1. Die Endlösung (z. B. 2 M H2SO4) wird in derselben Reihenfolge wie das Substrat hinzugefügt.
2. Nach Zugabe der Endlösung ändert sich die Farbe von blau auf gelb (TMB-System).
3. Verwenden Sie die Plattenschüttelfunktion des Mikroplattenlesers, um eine geeignete Geschwindigkeit und Zeit (normalerweise mittlere Geschwindigkeit, 10-30 Sekunden) auszuwählen, um eine gründliche Vermischung der Flüssigkeit in jedem Brunnen zu gewährleisten.
4. Lassen Sie die Mischung 1 ̊2 Minuten stehen; sobald die Blasen verschwunden sind, bereiten Sie sich auf die Messung vor.

Schlüsselpunkt der Qualitätskontrolle: Die Zusatzfolge und die Intervalle der Endlösung müssen mit denen des Substrats übereinstimmen.Sicherstellung, dass die Farbentwicklungszeit in allen Bohrungen identisch istNach dem Schütteln der Platte muss sie für das Entschäumen stehen bleiben; Blasen können die Absorptionswerte stark beeinträchtigen und zu unterschätzten Ergebnissen führen.

Schritt 7: Absorptionsmessung

1. Überprüfen Sie die Mikroplatte, um sicherzustellen, dass keine Blasen, kein Flüssigkeitsleck oder Flüssigkeit außerhalb der Brunnen vorhanden sind.
2. Die Mikroplatte wird korrekt in den Mikroplattenhalter für den Mikroplattenleser gelegt, wobei auf die Ausrichtung (Bohrungsposition A1) zu achten ist.
3. Wählen Sie das entsprechende Erkennungsprogramm auf dem Touchscreen aus und überprüfen Sie, ob die Wellenlänge korrekt eingestellt ist (Hauptwellenlänge + Referenzwellenlänge).
4. Überprüfen Sie, ob die Konfiguration des Plattenlayouts mit der tatsächlichen Plattenlayout übereinstimmt.
5. Erste Messung: Das Gerät misst automatisch die Vollplattenabsorbanz.
6. Nach Abschluss der Messung werden die Rohdaten überprüft, um alle Ausreißer (z. B. durch Blasen verursachte ungewöhnlich niedrige Werte) zu überprüfen.

Qualitätskontrolle Schlüsselpunkt: Die Messungen sollten innerhalb von 5 Minuten nach Beendigung des Verfahrens durchgeführt werden, um weitere Farbveränderungen zu verhindern.630 nm) können Störungen durch Kratzer oder Flecken am Brunnenboden beseitigen.Alle Bohrungen, die abnormale Messwerte aufweisen, sollten markiert oder erneut gemessen werden.

Schritt 8: Datenverarbeitung und Ergebnisüberprüfung

1. Die Software berechnet automatisch den leeren Mittelwert, die Standardkurve und die Probenkonzentration.
2. Validierung der Standardkurve: Der Korrelationskoeffizient R2 sollte ≥ 0,99 sein (oder den Spezifikationen des Kits entsprechen); die berechnete Konzentrationsabweichung sollte innerhalb eines akzeptablen Bereichs liegen.
3. Prüfung von Qualitätskontrollproben: Der gemessene Wert der Qualitätskontrollprobe sollte innerhalb des Bereichs von ±2 SD des Zielwerts liegen.Mindestens zwei Qualitätskontrollproben müssen gleichzeitig kontrolliert werden.
4. Überprüfung der Probenergebnisse: Überprüfen Sie, ob keine Proben außerhalb des Standardkurvenbereichs vorliegen (sie sollten verdünnt und erneut analysiert werden).
5. Überprüfung der Gültigkeit der Ergebnisse: Sowohl die Standardkurve als auch die Qualitätskontrolle erfüllten die Anforderungen; die Ergebnisse für diese Charge sind gültig.
6. Daten speichern, Berichte drucken, unterschreiben und archivieren

Schlüsselpunkte der Qualitätskontrolle: Jede Testsparte muss Qualitätskontrollproben enthalten; wenn die Ergebnisse der Qualitätskontrolle nicht den Anforderungen entsprechen,Die gesamte Ergebnissecharge gilt als ungültig und kann nicht gemeldet werden.Die Standardkurvenanpassmethode sollte auf der Grundlage der Eigenschaften des Tests ausgewählt werden; nicht alle Tests eignen sich für eine lineare Regression.

IV. Sieben wesentliche Faktoren, die die Genauigkeit der Absorptionsmessung beeinflussen

1. Lichtquellenstabilität und Lebensdauer

Die Lichtstärke von Halogenlampen nimmt mit der Zeit allmählich ab, und Spannungsschwankungen können auch zu Schwankungen der Lichtstärke führen.Diese Instabilität der Lichtquelle führt direkt zu Drift bei Absorptionsmessungen und stellt eine wichtige Quelle für Variationen von Charge zu Charge dar..

Einwirkungsgrad: Die Alterung der Lichtquelle kann zu einer Abweichung der Messwerte von 5% bis 15% führen.

Kontrollmaßnahmen: Verwenden Sie hochwertige importierte Halogenlampen, um eine stabile Lichtstärke zu gewährleisten; vor jeder Verwendung vorwärmen Sie die Vorrichtung 15-30 Minuten lang;die Messungen erst nach der Stabilisierung der Lichtquelle vornehmenDie Lichtquellen müssen nach Ablauf ihrer Lebensdauer unverzüglich ersetzt werden.

2. Optische Pfadkonsistenz und Variablen zwischen den Schülern

Die optischen Pfadmerkmale jedes einzelnen Kanals in einem Mehrkanal-Mikroplattenleser können nicht vollkommen identisch sein; ist der optische Pfad nicht optimal gestaltet,es kann zu unterschiedlichen Messwerte für dieselbe Lösung in verschiedenen Bohrungen führenEine achtkantige vertikale Optikbahn maximiert die Konsistenz der optischen Pfade in allen Bohrungen.

Aufprallgrad: Optische Schwankungen können dazu führen, dass der CV zwischen den Löchern 1% überschreitet.

Kontrollmaßnahmen: Verwenden Sie einen ELISA-Lesegerät mit vertikaler optischer Bahn; führen Sie regelmäßige Interwell-Konsistenzprüfungen durch; für kritische VersucheDurchführung von Intra-Well-Replikationen und Berechnung des Mittelwerts; die Referenzwellenlänge zur Korrektur von Schwankungen der Bodenbedingungen verwenden.

3. Filterwellenlänge Genauigkeit

Die zentrale Wellenlänge und die halbe Breite eines Filters beeinflussen unmittelbar die Spezifität und Empfindlichkeit der Detektion.Die Abweichung der Wellenlänge kann dazu führen, dass der Absorptionswert vom wahren Wert abweichtDie optimale Wellenlänge für verschiedene Reagenzchargen kann leicht variieren.

Aufschlagsebene: Eine Wellenlängenverschiebung von 5 nm kann eine Abweichung der Messung von 3%~10% verursachen.

Kontrollmaßnahmen: Verwendung hochwertiger Störfilter; regelmäßige Wellenlängenkalibrierung; Auswahl der richtigen Wellenlänge gemäß den Reagenzanweisungen;die Standardkonfiguration umfasst herkömmliche kolorimetrische Systeme mit Wellenlängen von 405/450/492/630 nmFür spezielle Anwendungen sind geeignete zusätzliche Filter auszuwählen.

4. Mikroplattenqualität und Bodenverhältnisse

Bei verschiedenen Marken und Chargen von Mikroplattenprodukten können unterschiedliche Lichtdurchlässigkeitsniveaus auftreten.oder Flüssigkeitsrückstände auf dem Brunnenboden können die Lichtübertragung behindernDer Verdunstungseffekt (Kanten-Effekt) an den Kanten der Bohrungen kann ebenfalls Einfluss auf die Versuchsergebnisse haben.

Aufprallgrad: Die Schwankungen zwischen den Platten können zwischen 5% und 10% liegen; durch kontaminierte Löcher können ungewöhnlich hohe Messwerte ergeben werden.

Kontrollmaßnahmen: Verwenden Sie qualitativ hochwertige, transparente ELISA-Platten; Verwenden Sie für jedes Experiment Platten aus derselben Charge; Vermeiden Sie die Berührung des Brunnenbodens während des Betriebs;Überprüfen und reinigen Sie den Brunnenboden vor dem Lesen■ Bei erheblichen Randwirkungen ist die Verwendung von Randbrunnen zu vermeiden oder eine Feuchtigkeitsbehandlung anzuwenden.

5. Blasen- und Flüssigkeitshomogenität

Bei der Probenzugabe oder beim Plattenschütteln entstehende Blasen können die Absorptionsmessungen stark beeinträchtigen; da das Licht normalerweise nicht durch diese Blasen hindurchgehen kann,Dies führt zu ungewöhnlich niedrigen MesswertenUngleichmäßiges Mischen von Flüssigkeiten kann zu einer ungleichmäßigen Konzentrationsverteilung innerhalb derselben Quelle führen.

Wirkung: Durch Blasen kann der einzelne Lochwert um mehr als 20% unterschätzt oder sogar zu falsch-negativen Ergebnissen führen.

Kontrollmaßnahmen: Vermeidung der Blasenbildung während der Probenerhöhung; Aufrechterhaltung einer angemessenen Schüttelgeschwindigkeit, um starke Schüttelungen zu verhindern, die zur Blasenbildung führen können;lassen Sie die Mischung 1 ̊2 Minuten stehen, bevor Sie die Messung ablesen, um Blasen zu beseitigenWenn Blasen festgestellt werden, entfernen Sie sie mit Hilfe einer Nadel oder einer Zentrifuge; bei Bohrungen mit ungewöhnlich niedrigen Messwerten überprüfen Sie, ob Blasen vorhanden sind.

6. Umgebungstemperatur und Luftfeuchtigkeit

Die Umgebungstemperatur beeinflusst sowohl die Reaktionsgeschwindigkeit der Reagenzien als auch die Enzymaktivität sowie die Stabilität der elektronischen Komponenten.Störung des optischen WegesUmgekehrt kann eine unzureichende Luftfeuchtigkeit statische Elektrizität erzeugen, was den Betrieb des Geräts beeinträchtigt.

Schlagpegel: Eine Temperaturschwankung von 5°C kann dazu führen, dass sich die Reaktionsgeschwindigkeit um 10%~20% ändert.

Kontrollmaßnahmen: Die Labortemperatur zwischen 20°C und 25°C und die relative Luftfeuchtigkeit zwischen 40% und 70% aufrechterhalten; den direkten Luftstrom von der Klimaanlage auf die Instrumente vermeiden;Position von Geräten fern von Wärmequellen und direktem Sonnenlicht; für die Inkubation einen Inkubator verwenden; nicht bei Raumtemperatur inkubatieren.

7Vibrationen und elektromagnetische Störungen

Externe Schwingungen können die Stabilität des optischen Weges beeinträchtigen und zu Schwankungen bei der Ablesung führen.die zu Datenanomalien führenDas Gerät sollte auf einer robusten Laborbank, fern von Schwingungsquellen wie Zentrifugen oder Oszillatoren sowie von starken elektromagnetischen Geräten, aufgestellt werden.

Schlagpegel: Vibrationen können Schwankungen der Messwerte und eine geringere Wiederholbarkeit verursachen.

Betriebsvorsichtsmaßnahmen: Das Gerät auf eine stabile, ebene Laborbank legen; es von Schwingungsquellen und starken elektromagnetischen Geräten fernhalten;Verwenden Sie einen Stromadapter, um die Störung der Stromversorgung zu minimieren.- erforderlichenfalls eine regulierte Stromversorgung.

V. Leitfaden für die Auswahl des Standardkurvenanbaumodus

Der MY-628 enzymgebundene Immunabsorptionsmessgerät verfügt über acht eingebaute Berechnungsmodi.Der geeignete Einbaumodus sollte anhand der Dosis-/Antwortkurvenmerkmale des Tests ausgewählt werden, um die genauesten Ergebnisse der Konzentrationsberechnung zu erhalten..

Auswahlprinzip:

1. Die in der Gebrauchsanleitung des Gerätes empfohlene Anbringungsart ist vorrangig zu beachten.
2. Wenn keine Empfehlung verfügbar ist, wählen Sie das geeignete Verfahren anhand der Form der Standardkurve aus: für eine lineare Kurve wählen Sie "Linear"; für eine S-förmige Kurve:Wählen Sie "Logarithmisch" oder "Absorptionsanteil Logarithmische Konzentration"; für komplexe Kurven wählen Sie "Cubic" oder "Spline".
3. Überprüfung unter Verwendung von Standard-Referenzmaterialien, um den Modus mit der geringsten Neukalibrierungsabweichung zu bestimmen.
4. Die quantitativen Ergebnisse müssen innerhalb des Bereichs der Standardkurve liegen; falls ein Ergebnis außerhalb dieses Bereichs liegt, sollte die Probe verdünnt und erneut analysiert werden.

VI. Anwendung der Hemmungsrate im Bereich der Lebensmittelsicherheit

Der ELISA-Leser (Enzym-linked immunosorbent assay) MY-628 ist mit einem speziellen Modul zur Messung der Hemmungsrate ausgestattet.besonders geeignet für Anwendungen im Bereich der schnellen Screening in der Landwirtschaft und der Lebensmittelsicherheitsprüfung.

1. Methode der Hemmungsrate Detektionsprinzip

Die Methode der Hemmungsrate basiert auf dem Prinzip der Enzymhemmung und wird üblicherweise zur schnellen Detektion von Organophosphor- und Carbamatpestizidrückständen verwendet:

1. Cholinesterase katalysiert die Hydrolyse von Substraten (z. B. Thiocyanocholine Jodid) und löst eine kolorimetrische Reaktion aus.
2. Pestizidrückstände können die Aktivität der Cholinesterase hemmen; der Grad der Hemmung ist direkt proportional zur Pestizidkonzentration.
3. Es wird festgestellt, ob die Pestizidrückstände den zulässigen Grenzwert überschreiten, indem die Hemmungsrate der Enzymaktivität gemessen wird, nachdem die Probe hinzugefügt wurde.
4. Hemmungsrate (%): (1 ¢ Probenabsorptionsgrad / Blank-Absorptionsgrad) × 100%
5. Wenn die Hemmungsrate einen Schwellenwert überschreitet (normalerweise 50% oder 70%), wird das Ergebnis als positiv eingestuft und muss mit Hilfe einer instrumentellen Methode weiter bestätigt werden.

2Schlüsseloperative Schritte für die Messung der Hemmungsrate

1. Probenextraktion: Pestizidrückstände aus Lebensmittelproben mit Standardmethoden extrahieren.
2. Reagenzvorbereitung: Enzymreagenzien, Substrate und chromogene Reagenzien sollten nach den vorgegebenen Anforderungen vorbereitet werden.
3. Reaktion: Das Probenextrakt mit dem Enzymreagenz mischen und für eine bestimmte Zeit bei 37°C inkubieren.
4. Das Substrat und das chromogene Reagenz hinzugefügt; nach Abschluss der Reaktion die Absorbanz gemessen.
5. Das Gerät berechnet automatisch die Unterdrückungsrate und liefert nach dem Vergleich mit dem Schwellenwert ein Bestimmungsresultat.

Anmerkung: Die Methode der Hemmungsrate ist eine schnelle Screening-Technik; positive Ergebnisse müssen mittels instrumentaler Methoden wie Gaschromatographie oder Flüssigchromatographie bestätigt werden.Es kann nicht unmittelbar als Grundlage für die Verhängung von Sanktionen verwendet werden.

3- Qualitätskontrollanforderungen für die Bestimmung der Hemmungsrate

• Für jede Prüfungssparte müssen eine blanke und eine positive Kontrolle eingesetzt werden.
• Die Absorptionsfähigkeit der Blindkontrolle sollte innerhalb des Normalbereichs liegen (typischerweise > 0,3), was auf eine normale Enzymaktivität hinweist.
• Die Hemmungsrate der positiven Kontrollen sollte das erwartete Niveau erreichen, was darauf hindeutet, dass das Reagenz wirksam ist.
• Bei wiederholten Probenuntersuchungen sollte der Unterschied der Hemmungsrate innerhalb eines akzeptablen Bereichs liegen.
• Verwenden Sie regelmäßig zertifizierte Referenzmaterialien, um die Genauigkeit der Messungen zu überprüfen

VII. Fünf typische Anwendungsfälle

Szenario 1: Klinisches Labor für klinische immunologische Untersuchungen

Hauptherausforderung: Große klinische Stichprobengrößen und eine breite Palette von Prüfmitteln (z. B. Hormone, Tumormarker, Infektionskrankheitsantikörper, Autoantikörper usw.)) ?? wenn die Testergebnisse eine direkte Auswirkung auf die klinische Diagnose haben ?? sehr hohe Anforderungen an Genauigkeit und Reproduzierbarkeit stellen, und müssen den Anforderungen der externen Qualitätsbewertung (EQA) entsprechen.

Lösung: Ein vertikaler optischer 8-Kanal-Pfad sorgt für die Konsistenz zwischen den Löchern mit einer Wiederholgenauigkeit von ≤ 0,3%, was den Präzisionsanforderungen für klinische Prüfungen entspricht.unterstützt bis zu 15 Filter für die Multiprozedur-Erkennung bei verschiedenen Wellenlängen■ verfügt über 500 Programmspeicherplätze für den bequemen Zugriff auf vorgegebene Parameter für jeden Testpunkt; ermöglicht die Speicherung von bis zu 100.000 Testergebnissen,Erleichterung der Rückverfolgbarkeit historischer Daten und Analyse externer Qualitätsbewertungen; enthält einen 7-Zoll-Touchscreen für die visuelle Anordnung des Panels, wodurch Betriebsfehler reduziert werden.

Szenario 2: Prüfstelle für Lebensmittelsicherheit

Herausforderung: Lebensmittelproben umfassen eine Vielzahl von Arten und große Chargengrößen mit zahlreichen Prüfparametern, darunter Pestizidrückstände, Rückstände von Tierarzneimitteln, Mykotoxine,und Allergene, die sowohl ein schnelles Screening als auch eine genaue quantitative Analyse erfordernDie Ergebnisse der Prüfungen haben unmittelbare Auswirkungen auf die Lebensmittelsicherheit und die Interessen der Unternehmen.

Lösung: Ein spezielles Modul zur Messung der Hemmungsrate zur Unterstützung des schnellen Screenings von Pestizidrückständen; 8 Berechnungsmodi, die sowohl quantitative als auch qualitative Analyseanforderungen abdecken;breiter Messbereich von 0 ̊4.000 Abs, so dass Proben sowohl bei hohen als auch bei niedrigen Konzentrationswerten erkannt werden können; die Funktion der dreistufigen Schüttelplatte sorgt für eine gründliche Reaktion;Leichtgewichtskonstruktion von 5 kg erleichtert mobile Feldversuche; kompatibel mit einem breiten Spannungsbereich von AC 100~240 V und an verschiedene Prüfumgebungen angepasst.

Szenario 3: Labor für Umweltüberwachung

Herausforderung: Umweltproben (Wasser, Boden, atmosphärische Ablagerungen) weisen komplexe Matrizen und niedrige Schadstoffkonzentrationen auf, die hochempfindliche Nachweismethoden und große Stichprobengrößen erfordern;der Testumfang umfasst Umwelthormone, Schwermetalle, organische Schadstoffe und andere Stoffe.

Lösung: Hohe Auflösung (0,001 Abs) ermöglicht eine genaue Detektion auch bei Proben mit geringer Konzentration; hohe Stabilität (≤ ± 0,003 Abs) sorgt für einheitliche Datenergebnisse bei längeren Chargetests;mehrere Einbaumodi bieten die unterschiedlichen charakteristischen Kurven verschiedener Schadstoffe­ professionelle Arbeitsplatzsoftware unterstützt komplexe Datenverarbeitung und statistische Analyse; die Speicherung mit großer Kapazität erfüllt die langfristigen Anforderungen an die Datenverwaltung für die Umweltüberwachung.

Szenario 4: Biopharmazeutische Forschungslaboratorium

Schlüsselherausforderung: Forschungsversuchsproben sind knapp und die Testparameter sind breit (z. B. Zytokine, Proteinkonzentrationen, Antikörpertiter, Entwicklung von ELISA-Kits usw.),erfordert flexible Parameter-Einstellungen und robuste DatenverarbeitungskapazitätenDie Reproduzierbarkeit von Experimenten hat einen direkten Einfluss auf die Glaubwürdigkeit der in Forschungsarbeiten dargestellten Daten.

Lösung: Acht Berechnungsarten, einschließlich fortgeschrittener Anpassungstechniken wie Spline-Funktionen, erfüllen die komplexen Anforderungen der Datenanalyse der wissenschaftlichen Forschung.angepasste Filter unterstützen die Entwicklung neuer Analysemethoden• eine flexible Visualisierungsoberfläche ermöglicht die Erstellung verschiedener experimenteller Layouts; die hochauflösende Aufnahme (0,001 Abs) ermöglicht den Nachweis subtiler Signalvariationen;Daten können für weitere statistische Analysen exportiert werden, die den Datenanforderungen wissenschaftlicher Publikationen entsprechen.

Szenario 5: Labor für Veterinärmedizin/Qualitätskontrolle in der Futtermittelindustrie

Die wichtigste Herausforderung: Die großen Chargen, die sowohl bei den Inspektionen der Rohstoffe als auch bei den Inspektionen der fertigen Produkte erforderlich sind, um Parameter wie Rückstände von Tierarzneimitteln, Mykotoxine,Vitamine, und Proteine erfordern schnelle und genaue Testergebnisse zur Unterstützung der Qualitätskontrolle; zusätzlich gelten strenge Kostenkontrollanforderungen.

Lösung: Einplatten-Hochleistungsdetektionssystem mit 96 Bohrungen, mit dem die Ablesung innerhalb von 3 ̊5 Minuten abgeschlossen werden kann, um die Anforderungen der Chargetests zu erfüllen;Importierte Halogenlampen bieten eine längere Lebensdauer, die Verbrauchskosten senken; benutzerfreundlicher Betrieb und geringe Ausbildungskosten; 500 vorkonfigurierte Programme ermöglichen einen schnellen Wechsel zwischen verschiedenen Prüfpunkten;automatische Berechnung und Speicherung der Ergebnisse minimieren manuelle Aufzeichnungsfehler und erhöhen die Effizienz der Qualitätsprüfung.

VIII. Biosicherheits- und Betriebsverfahren im Labor

Die ELISA-Prüfung umfasst biologische Proben und chemische Reagenzien; daher müssen die Biosicherheits- und chemischen Sicherheitsprotokolle streng beachtet werden:

• Biosicherheitsvorkehrungen: Klinische Proben können Krankheitserreger enthalten; tragen Sie daher Handschuhe und eine Gesichtsmaske während der Handhabung; tragen Sie bei Bedarf Schutzkleidung.Vermeiden Sie den Kontakt der Proben mit der Haut oder den Schleimhäuten.
• Chemische Reagenzsicherheit: Substrate (z. B. TMB), Stopplösung (z. B. Schwefelsäure), Waschlösungen usw.) sind gemäß den Richtlinien für chemische Sicherheit zu verwenden.Die Stopplösung ist eine starke Säure.Vermeiden Sie den Kontakt mit Haut oder Augen; tragen Sie während der Handhabung Schutzbrillen.
• Abfallflüssigkeitsentsorgung: Versuchsabfallflüssigkeiten (mit Substraten, Endlösungen oder biologischen Proben) werden nach den Leitlinien für die Einstufung von Laborabfällen gesammelt;sie dürfen nicht direkt in die Abwasserkanalisation abgelassen werdenDie Abfallflüssigkeiten der klinischen Proben müssen vor der Entsorgung desinfiziert werden.
• Verunreinigungskontrolle: Bei der Zugabe von Proben ist die Pipettenspitze zu ersetzen, um eine Kreuzkontamination zu verhindern; bei der Handhabung positiver Proben ist besondere Vorsicht geboten, um die Bildung von Aerosolen zu vermeiden.die Arbeitsbank regelmäßig desinfizieren.
• Elektrische Sicherheit: Verwenden Sie einen zertifizierten Netzteil und sorgen Sie für eine ordnungsgemäße Erdung.Schalten Sie den Strom aus und wenden Sie sich an den technischen Support für die Reparatur.
• Schutz des Touchscreen: Verwenden Sie den Finger oder einen speziellen Stift, um den Bildschirm zu bedienen; benutzen Sie keine scharfen Gegenstände, um auf den Bildschirm zu tippen, und vermeiden Sie, ihn zu stark zu drücken oder zu kratzen.Verwenden Sie eine weiche, leicht feuchtes Tuch ️ Sprühen Sie keine Flüssigkeit direkt auf den Bildschirm.
• Handhabung von Mikroplatten: Verwendete Mikroplatten sind nach dem Autoklaven als biologisch gefährlicher Abfall zu entsorgen. Einweg-ELISA-Platten dürfen nicht wiederverwendet werden.
• Notfallbehandlung: Wenn das Reagenzmittel mit der Haut in Berührung kommt, sofort mit viel Wasser spülen; wenn es in die Augen gelangt,15 Minuten lang mit einer Augenwaschstation spülen und medizinische Hilfe suchen- im Falle eines Probenverschüttens mit einem Desinfektionsmittel behandelt werden.