Ολοκληρωμένος οδηγός για την επαναληψιμότητα δεδομένων ανοσοθεραπείας και τον πειραματικό έλεγχο ποιότητας για αναγνώστη μικροπλακών

Ολοκληρωμένος οδηγός για την επαναληψιμότητα δεδομένων ανοσοθεραπείας και τον πειραματικό έλεγχο ποιότητας για αναγνώστη μικροπλακών

Ι. Γιατί η επαναληψιμότητα των δοκιμών ELISA έχει καταστεί βασική πρόκληση για την αξιοπιστία των εργαστηριακών δεδομένων

1.1 Κρίση ανίχνευσης που προκλήθηκε από ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα

Κατά τη διάρκεια επιθεώρησης δειγματοληψίας ασφάλειας των τροφίμων, ένας οργανισμός δοκιμών τρίτου μέρους πραγματοποίησε δοκιμή ELISA για την ανίχνευση υπολειμμάτων φυτοφαρμάκων στο ίδιο δείγμα λαχανικών.ότι η επανεξέταση έφερε θετικό αποτέλεσμα (υπερβαίνοντας το επιτρεπόμενο όριο)Και οι δύο δοκιμές χρησιμοποίησαν την ίδια παρτίδα αντιδραστηρίων, τον ίδιο χειριστή και τον ίδιο αναγνώστη μικροπίνακων, αλλά τα αποτελέσματα ήταν εντελώς αντιφατικά.Το πρόβλημα εντοπίστηκε ως προκύπτοντας κατά τη διάρκεια της διαδικασίας ανάγνωσης του αναγνώστη μικροπίνακας: κατά τη διάρκεια της αρχικής δοκιμής, η μικροπίνακα δεν είχε επιτρέψει να παραμείνει σταθερή επαρκώς, αφήνοντας μικροσκοπικές φυσαλίδες αέρα στα πηγάδια,που οδήγησε σε υποτιμημένη ανάγνωση της απορρόφησης και σε εσφαλμένο αρνητικό αποτέλεσμα.

Λόγω της υψηλής ευαισθησίας, της ισχυρής ειδικότητάς της και της φιλικής προς το χρήστη λειτουργίας, οι δοκιμές ELISA έχουν υιοθετηθεί ευρέως στην κλινική διάγνωση, την ασφάλεια των τροφίμων, την ασφάλεια των τροφίμων και την ασφάλεια των τροφίμων.Περιβαλλοντική παρακολούθησηΩστόσο, οι διαδικασίες ELISA περιλαμβάνουν πολλά βήματα και πολύπλοκους παράγοντες επιρροής.και επώαση έως πλύσηΗ διακοπή του χρώματος και η ανάγνωση μπορεί να οδηγήσουν σε ανώμαλα αποτελέσματα. the accuracy and stability of the enzyme-linked immunosorbent assay reader's readings represent the final safeguard for ensuring the reliability of the final data—and yet this step is often the most easily overlooked.

Μια ανακριβής ανάγνωση της απορρόφησης μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς αρνητική ερμηνεία ενός θετικού δείγματος ή σε ψευδώς θετική ερμηνεία ενός αρνητικού δείγματος.Τα ψευδώς αρνητικά μπορεί να καθυστερήσουν την κατάλληλη θεραπεία, ενώ τα ψευδώς θετικά αποτελέσματα μπορεί να οδηγήσουν σε περιττές ιατρικές επεμβάσεις.ότι τα ψευδώς θετικά αποτελέσματα μπορούν να προκαλέσουν αδικαιολόγητες οικονομικές απώλειες στις επιχειρήσειςΗ επαναληψιμότητα και η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων των δοκιμών ELISA είναι πιο κρίσιμες από ποτέ.

1.2 Τέσσερα βασικά στοιχεία για την αξιολόγηση της αξιοπιστίας των δεδομένων δοκιμών ELISA

Η ακρίβεια και η αναπαραγωγικότητα των αποτελεσμάτων της δοκιμής ELISA εξαρτώνται από τον συνεργικό έλεγχο τεσσάρων βασικών βασικών στοιχείων:

• Σημειώσεις σχετικά με το αντιδραστήρα: ποιότητα και τίτλος αντισωμάτων/αντιγόνων, δραστηριότητα συνδυασμένων ενζύμων, φρεσκάδα των υπόστρωτων,και η ακρίβεια των υλικών αναφοράς αποτελούν τη βάση για αξιόπιστα αποτελέσματα της δοκιμήςΟι διαφορές μεταξύ των παρτίδων αντιδραστηρίων, η ακατάλληλη αποθήκευση ή οι παλαιότεροι αντιδραστήρες ή οι αποτυχημένοι αντιδραστήρες μπορούν να οδηγήσουν σε αποκλίσεις στα αποτελέσματα.
• Λειτουργικοί παράγοντες: ακρίβεια και συνέπεια της προσθήκης δείγματος, ακριβής έλεγχος της θερμοκρασίας και της διάρκειας επώασης, επάρκεια του πλύματος,και η σωστή διαχείριση του χρόνου ανάπτυξης του χρώματος είναι κρίσιμες για να εξασφαλιστεί η πειραματική αναπαραγωγικότηταΟι διακυμάνσεις στις χειροκίνητες εργασίες αποτελούν τις κύριες πηγές της διακυμάνσεως από παρτίδα σε παρτίδα και από πηγή σε πηγή.
• Οπτική σταθερότητα, ακρίβεια μήκους κύματος, επαναληψιμότητα ανάγνωσης.και η λειτουργία κλονισμού πλάκας του αναγνώστη μικροπίνακων είναι ζωτικής σημασίας για τη διασφάλιση της ακρίβειας των τελικών δεδομένωνΕάν η απόδοση του οργάνου είναι χαμηλότερη από την ορθή ή η κατάσταση του είναι κακή, όλες οι προηγούμενες προσπάθειες μπορεί να καταστούν μάταιες.
• Περιβαλλοντικοί παράγοντες: Η θερμοκρασία του εργαστηρίου, η υγρασία, η έκθεση στο φως και οι δονήσεις είναι εξωτερικές συνθήκες που επηρεάζουν τη σταθερότητα του πειράματος.Οι διακυμάνσεις του περιβάλλοντος μπορούν να επηρεάσουν τη δραστηριότητα των αντιδραστηρίων και την ταχύτητα αντίδρασης, που οδηγεί σε παράκαμψη των αποτελεσμάτων.

Ο πολυλειτουργικός αναλυτής ELISA MY-628 διαθέτει εισαγόμενη πηγή φωτός αλογενίου, σύστημα οκτάκτινης κάθετης οπτικής διαδρομής, φίλτρα υψηλής ακρίβειας και εξειδικευμένο αναλυτικό λογισμικό,παροχή αξιόπιστης εγγύησης σε επίπεδο οργάνων για την ακρίβεια και την αναπαραγωγικότητα των δεδομένων δοκιμής ELISAΌταν συνδυάζονται με τυποποιημένες εργαστηριακές διαδικασίες και διαχείριση ελέγχου ποιότητας,Αυτό το όργανο βοηθά τα εργαστήρια να ξεπεράσουν την πρόκληση της "μεταβλητότητας από παρτίδα σε παρτίδα" και να δημιουργήσουν ένα αξιόπιστο σύστημα δεδομένων ανοσολογικής ανάλυσης.

ΙΙ. Βασικές τεχνικές προδιαγραφές και μήτρα ικανότητας ελέγχου ποιότητας

ΙΙΙ. Οκτά-βήματα τυποποιημένης διαδικασίας ανίχνευσης και ανάγνωσης ELISA

Βήμα 1: Πειραματική προετοιμασία και εξισορρόπηση αντιδραστηρίου

1. Αφαιρέστε το κιτ από το ψυγείο 30 λεπτά πριν και αφήστε το να ισορροπήσει σε θερμοκρασία δωματίου, έτσι ώστε η θερμοκρασία του αντιδραστήρα να ταιριάζει με τη θερμοκρασία του εργαστηρίου.
2. Ελέγξτε την ημερομηνία λήξης των αντιδραστηρίων και βεβαιωθείτε ότι όλα τα συστατικά, όπως τα συνδυασμένα ένζυμα, τα υποστρώματα και τα διαλύματα τερματισμού, είναι σε καλή κατάσταση.
3. Προετοιμάστε το διάλυμα καθαρισμού· αραιώστε το συμπυκνωμένο διάλυμα καθαρισμού σύμφωνα με τις οδηγίες.
4. Προετοιμάστε τα απαιτούμενα καταναλωτικά: πιπέτες, πινακίδες, πλάκες 96 πηγών, χρονόμετρο κλπ.
5. Ενεργοποιήστε τον αναγνώστη μικροπίνακων και αφήστε τον να προθερμίσει για 15-30 λεπτά για τη σταθεροποίηση της φωτεινής πηγής και του συστήματος οπτικής διαδρομής.

Βασικά σημεία ελέγχου ποιότητας: Η μη πλήρης ισορροπία των αντιδραστηρίων μπορεί να οδηγήσει σε ασυνεπή ταχύτητες αντίδρασης, η οποία είναι μια κοινή αιτία μεταβλητότητας από παρτίδα σε παρτίδα.Η ανεπαρκής προθέρμανση του αναγνώστη ELISA μπορεί να προκαλέσει εκτροπή αρχικής ανάγνωσης., επηρεάζοντας έτσι την ακρίβεια των μετρήσεων.

Βήμα 2: Αυτόματος έλεγχος και επαλήθευση των επιδόσεων του αναγνώστη ELISA

1. Ενεργοποιήστε τον αναγνώστη μικροπίνακων και περιμένετε να ολοκληρώσει το όργανο την αυτοεξέταση.
2. Ελέγξτε την κατάσταση της φωτεινής πηγής και επιβεβαιώστε ότι ο λαμπτήρας αλογονίου λειτουργεί σωστά.
3. Διεξάγεται ενδιάμεση επαλήθευση με χρήση κενής πλάκας ή πλάκας βαθμονόμησης για να επιβεβαιωθεί ότι οι ενδείξεις βρίσκονται εντός του κανονικού εύρους.
4. Ελέγξτε αν ο τροχός του φίλτρου περιστρέφεται ομαλά και αν η διακόπτρια μήκους κύματος λειτουργεί σωστά.
5. Βεβαιωθείτε ότι η οθόνη αφής και το λογισμικό λειτουργούν κανονικά, χωρίς να εμφανίζονται μηνύματα σφάλματος.

Βασικό σημείο ελέγχου της ποιότητας: Διενεργείται επαλήθευση της απόδοσης κατά την εκκίνηση κάθε συστήματος· αυτή είναι προϋπόθεση για τη διασφάλιση της ακρίβειας των δεδομένων.Συνιστάται να διενεργείται μια περιεκτική περιοδική επαλήθευση με τη χρήση τυποποιημένης πλάκας αναφοράς απορρόφησης μία φορά την εβδομάδα..

Βήμα 3: Προσθήκη δείγματος και επώαση

1. Τοποθετήστε την πλάκα σύμφωνα με το πειραματικό πρωτόκολλο: κενά πηγάδια, τυποποιημένα πηγάδια, πηγάδια ελέγχου και πηγάδια δειγμάτων.
2. Προσθέστε με ακρίβεια το αντισώμα ή το αντιγόνο επικάλυψης (π.χ. όταν χρησιμοποιείτε μη επικάλυπτη πλάκα).
3. Προστίθεται το πρότυπο, το δείγμα ελέγχου και το δείγμα δοκιμής κατά σειρά· εξασφαλίζεται ότι ο όγκος που προστίθεται σε κάθε πηγάδι είναι συνεπής.
4. Προσθέστε το συνδυασμό ενζύμων και ανακινήστε απαλά για να αναμειχθεί καλά.
5. Εφαρμόζεται η ταινία σφράγισης και τοποθετείται το δείγμα σε θερμοκρασία 37 °C για τον καθορισμένο χρόνο επώασης.

Βασικά σημεία ελέγχου ποιότητας: Η προσθήκη δείγματος είναι το βήμα με το μεγαλύτερο δυναμικό σφάλματος στις διαδικασίες ELISA.Διατηρείται σταθερή ταχύτητα προσθήκης δείγματος για να αποφεύγονται παρατεταμένοι χρόνοι αντίδρασης σε πηγάδια που γεμίζουν πρώτα.

Βήμα 4: Πλύσιμο πιάτων

1. Μετά την ολοκλήρωση της επώασης, αφαιρείται το υγρό από τα πηγάδια.
2. Προσθέστε το διάλυμα πλύσης, αφήστε το να παραμείνει για 30 ̇ 60 δευτερόλεπτα και μετά πετάξτε το.
3. Επαναλαμβάνεται το πλύσιμο 3-5 φορές (όπως ορίζεται στο εγχειρίδιο χρήσης)
4. Μετά το τελευταίο πλύσιμο, στεγνώστε το δείγμα σε απορροφητικό χαρτί για να διασφαλιστεί ότι δεν παραμένει υπολειμματικό υγρό στους πόρους.

Βασικά σημεία ελέγχου της ποιότητας: Το ανεπαρκές πλύσιμο μπορεί να οδηγήσει σε αυξημένη μη ειδική δέσμευση, αυξημένα επίπεδα υποβάθρου και αυξημένα αποτελέσματα των αναλύσεων.το υπερβολικό πλύσιμο μπορεί να προκαλέσει την ελάτρωση της ειδικής δέσμευσηςΑποφύγετε να γρατζουνίζετε τον πάτο του πηγάδι κατά τη διάρκεια της ξήρανσης.

Βήμα 5: Ανταπόκριση στην ανάπτυξη χρώματος

1. Προσθέστε το διάλυμα υποστρώματος (π.χ. TMB) σε κάθε πηγάδι· η ποσότητα και η σειρά προσθήκης πρέπει να αντιστοιχούν σε εκείνες που χρησιμοποιούνται για την φόρτωση του δείγματος.
2. Για την ανάμειξη, μπορεί να χρησιμοποιηθεί η λειτουργία ανατροπής πλάκας σε αναγνώστη μικροπίνακας (χαμηλή ταχύτητα, σύντομη διάρκεια).
3. Η ενσωμάτωση του ενυδρείου στο φυτό πρέπει να γίνεται σε θερμοκρασία ± 5 °C.
4. Παρακολουθήστε την ανάπτυξη του χρώματος: τα θετικά πηγάδια θα πρέπει να παρουσιάζουν ένα ξεχωριστό μπλε χρώμα.

Βασικό σημείο ελέγχου ποιότητας: Ο χρόνος ανάπτυξης του χρώματος έχει σημαντική επίδραση στα αποτελέσματα και πρέπει να ελέγχεται αυστηρά.Συνιστάται να χρησιμοποιείται ένα χρονόμετρο start timing από τη στιγμή που το πρώτο υπόστρωμα προστίθεται στο πηγάδιΤο υπόστρωμα θα πρέπει να φυλάσσεται σε φωτεινό περιβάλλον για να αποφεύγεται η πρόωρη ανάπτυξη χρώματος.

Βήμα 6: Τερματίστε την αντίδραση και ανακατέψτε προσεκτικά χρησιμοποιώντας μηχανικό κουνιστήρα.

1. Προστίθεται το διαλύμα τερματισμού (π.χ. 2 M H2SO4) σε κάθε πηγάδι με την ίδια σειρά που προστέθηκε το υπόστρωμα.
2. Μετά την προσθήκη του διαλύματος τερματισμού, το χρώμα αλλάζει από μπλε σε κίτρινο (σύστημα TMB).
3. Χρησιμοποιήστε τη λειτουργία κλονισμού πλάκας στον αναγνώστη μικροπίνακων για να επιλέξετε κατάλληλη ταχύτητα και χρόνο (συνήθως μεσαία ταχύτητα, 10·30 δευτερόλεπτα) για να εξασφαλιστεί η πλήρης ανάμειξη του υγρού σε κάθε πηγάδι.
4. Αφήστε το μείγμα να παραμείνει για 1 ̇ 2 λεπτά· μόλις εξαφανιστούν οι φυσαλίδες, ετοιμαστείτε να πάρετε τη μέτρηση.

Βασικό σημείο ελέγχου της ποιότητας: Η ακολουθία προσθήκης και τα διαστήματα της λύσης τερματισμού πρέπει να αντιστοιχούν σε εκείνα που χρησιμοποιούνται για το υπόστρωμα,διασφάλιση ότι ο χρόνος ανάπτυξης του χρώματος είναι πανομοιότυπος σε όλα τα πηγάδιαΜετά την κούνηση της πλάκας, πρέπει να αφεθεί να παραμείνει για αποσφουρίσματος· οι φυσαλίδες μπορούν να επηρεάσουν σοβαρά τις ενδείξεις απορρόφησης, οδηγώντας σε υποτιμημένα αποτελέσματα.

Βήμα 7: Διάγνωση απορρόφησης

1. Ελέγξτε την μικροπίνακα για να βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχουν φυσαλίδες, διαρροές υγρού ή άλλο υγρό έξω από τα πηγάδια.
2. Τοποθετήστε σωστά τη μικροπίνακα στο θήκη για τον αναγνώστη μικροπίνακας, δίνοντας προσοχή στον προσανατολισμό (θέση πηγάδι A1).
3. Επιλέξτε το κατάλληλο πρόγραμμα ανίχνευσης στην οθόνη αφής και επαληθεύστε ότι οι ρυθμίσεις μήκους κύματος είναι σωστές (κύριο μήκος κύματος + μήκος κύματος αναφοράς).
4. Βεβαιωθείτε ότι η διαμόρφωση της διάταξης του πίνακα αντιστοιχεί στην πραγματική διάταξη του πίνακα.
5. Αρχική ανάγνωση: Το όργανο πραγματοποιεί αυτόματα μέτρηση της απορρόφησης πλήρους πλάκας.
6. Μετά την ολοκλήρωση της ανάγνωσης, επανεξετάστε τα ακατέργαστα δεδομένα για να ελέγξετε για τυχόν αποκλίνουσες τιμές (π.χ. ανωμαλία χαμηλών τιμών που προκαλούνται από φυσαλίδες).

Βασικό σημείο ελέγχου ποιότητας: Οι ενδείξεις πρέπει να λαμβάνονται εντός 5 λεπτών μετά τη λήξη της διαδικασίας για να αποφεύγονται περαιτέρω αλλαγές χρώματος.630 nm) μπορεί να εξαλείψει τις παρεμβολές που προκαλούνται από γρατζουνιές ή κηλίδες στον πάτο του πηγάδιΟποιαδήποτε πηγάδια παρουσιάζουν μη φυσιολογικές ενδείξεις πρέπει να σημειώνονται ή να μετρούνται εκ νέου.

Βήμα 8: Επεξεργασία δεδομένων και αναθεώρηση αποτελεσμάτων

1. Το λογισμικό υπολογίζει αυτόματα τον μέσο όρο κενού δείγματος, την τυποποιημένη καμπύλη και τη συγκέντρωση του δείγματος.
2. Επαλήθευση της τυποποιημένης καμπύλης: Ο συντελεστής συσχέτισης R2 θα πρέπει να είναι ≥ 0,99 (ή να συμμορφώνεται με τις προδιαγραφές του κιτ) · η υπολογιζόμενη απόκλιση συγκέντρωσης θα πρέπει να βρίσκεται εντός αποδεκτού εύρους.
3. Έλεγχος δειγμάτων ελέγχου ποιότητας: Η μετρούμενη τιμή του δείγματος ελέγχου ποιότητας πρέπει να βρίσκεται εντός της κλίμακας των ±2 SD της τιμής-στόχου.τουλάχιστον δύο δείγματα επιπέδου ελέγχου ποιότητας πρέπει να ελέγχονται ταυτόχρονα.
4. Επανεξέταση των αποτελεσμάτων δειγματοληψίας: Ελέγξτε για τυχόν δείγματα εκτός του εύρους της τυποποιημένης καμπύλης (αυτά πρέπει να αραιώνονται και να αναλύονται εκ νέου).
5. Έλεγχος της εγκυρότητας των αποτελεσμάτων: Τόσο οι δοκιμές της τυποποιημένης καμπύλης όσο και οι δοκιμές ελέγχου ποιότητας πληρούσαν τις απαιτήσεις· τα αποτελέσματα για την παρούσα παρτίδα είναι έγκυρα.
6. Αποθήκευση δεδομένων, εκτύπωση εκθέσεων, υπογραφή και αρχείο

Βασικά σημεία ελέγχου ποιότητας: Κάθε παρτίδα δοκιμών πρέπει να περιλαμβάνει δείγματα ελέγχου ποιότητας.η ολόκληρη παρτίδα αποτελεσμάτων θεωρείται άκυρη και δεν μπορεί να αναφερθείΗ τυποποιημένη μέθοδος προσαρμογής καμπύλης θα πρέπει να επιλέγεται με βάση τα χαρακτηριστικά της δοκιμής· δεν είναι όλες οι δοκιμές κατάλληλες για γραμμική παλινδρόμηση.

IV. Επτά βασικοί παράγοντες που επηρεάζουν την ακρίβεια της μέτρησης της απορρόφησης

1. Σταθερότητα της φωτεινής πηγής και διάρκεια ζωής

Η φωτεινή ένταση των λαμπτήρων αλογονίων μειώνεται σταδιακά με την πάροδο του χρόνου, και οι διακυμάνσεις τάσης μπορούν επίσης να προκαλέσουν μεταβολές της έντασης του φωτός.Αυτή η αστάθεια της φωτεινής πηγής οδηγεί άμεσα σε παρακλίσεις στις μετρήσεις απορρόφησης και αποτελεί σημαντική πηγή διακύμανσης από παρτίδα σε παρτίδα..

Επίπεδο επιδράσεως: Η γήρανση της φωτεινής πηγής μπορεί να προκαλέσει παρακλάδευση ανάγνωσης 5%·15%.

Μέτρα ελέγχου: Για τη διασφάλιση σταθερής έντασης φωτός, χρησιμοποιήστε εισαγόμενα λαμπτήρες αλογονίου υψηλής ποιότητας· προθέρμανση της συσκευής για 15-30 λεπτά πριν από κάθε χρήση.να λαμβάνουν μετρήσεις μόνον αφού η πηγή φωτός σταθεροποιηθεί· Ελέγξτε περιοδικά το σύστημα χρησιμοποιώντας μια τυποποιημένη πινακίδα αναφοράς απορρόφησης· αντικαταστήστε αμέσως την πηγή φωτός όταν έχει λήξει η διάρκεια ζωής της.

2Οπτική διαδρομή και διαπαιδαγωγικές διακυμάνσεις

Τα χαρακτηριστικά της οπτικής διαδρομής κάθε καναλιού σε έναν πολυκαναλικό αναγνώστη μικροπίνακων δεν μπορούν να είναι απόλυτα πανομοιότυπα.μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα διαφορετικές ενδείξεις για το ίδιο διάλυμα σε διαφορετικά πηγάδιαΗ σχεδίαση οκτακονητής κάθετης οπτικής διαδρομής μεγιστοποιεί τη συνοχή των οπτικών διαδρομών σε όλα τα πηγάδια.

Επίπεδο πρόσκρουσης: Οι διακυμάνσεις της οπτικής διαδρομής μπορούν να προκαλέσουν την υπέρβαση του 1% του CV μεταξύ των τρυπών.

Μέτρα ελέγχου: Χρησιμοποιήστε έναν αναγνώστη ELISA με κάθετο σχεδιασμό οπτικής διαδρομής.διεξάγει επαναλήψεις εντός του πηγάδι και υπολογίζει τη μέση τιμήΧρησιμοποιεί το μήκος κύματος αναφοράς για τη διόρθωση των διακυμάνσεων στις συνθήκες του βυθού.

3. Ακριβότητα μήκους κύματος φίλτρου

Το κεντρικό μήκος κύματος και το μισό πλάτος ενός φίλτρου επηρεάζουν άμεσα την ιδιαιτερότητα και την ευαισθησία της ανίχνευσης.Απόκλιση μήκους κύματος μπορεί να προκαλέσει την ανάγνωση απορρόφησης να αποκλίνει από την πραγματική τιμή· το βέλτιστο μήκος κύματος για διαφορετικές παρτίδες αντιδραστηρίων μπορεί να διαφέρει ελαφρά.

Επίπεδο αντίκτυπου: Μια μετατόπιση μήκους κύματος 5 nm μπορεί να προκαλέσει απόκλιση ανάγνωσης 3%~10%.

Μέτρα ελέγχου: Χρησιμοποιήστε υψηλής ποιότητας φίλτρα παρεμβολών· πραγματοποιήστε τακτική βαθμονόμηση μήκους κύματος· επιλέξτε το σωστό μήκος κύματος σύμφωνα με τις οδηγίες του αντιδραστήρα·η τυποποιημένη διαμόρφωση καλύπτει τα κύρια κολορομετρικά συστήματα με μήκη κύματος 405/450/492/630 nmΓια ειδικές εφαρμογές, επιλέξτε κατάλληλα πρόσθετα φίλτρα.

4. Ποιότητα μικροπίνακας και κατάσταση βυθού

Διαφορετικές μάρκες και παρτίδες προϊόντων μικροπίνακας μπορεί να παρουσιάζουν διαφορετικά επίπεδα διαπερατότητας του φωτός.ή υγρά υπολείμματα στο βάθος του πηγάδι μπορεί να εμποδίσει τη μετάδοση του φωτόςΤο φαινόμενο της εξάτμισης (φαινόμενο άκρου) στις άκρες των πηγών μπορεί επίσης να επηρεάσει τα πειραματικά αποτελέσματα.

Επίπεδο πρόσκρουσης: Η διακύμανση μεταξύ των πινάκων μπορεί να κυμαίνεται από 5% έως 10%· οι μολυσμένες τρύπες μπορεί να προκαλέσουν ανώμαλα υψηλά μετρήματα.

Μέτρα ελέγχου: Χρησιμοποιήστε υψηλής ποιότητας πλάκες ELISA υψηλής διαφάνειας. Χρησιμοποιήστε πλάκες από την ίδια παρτίδα για κάθε πείραμα. Αποφύγετε να αγγίζετε τον πάτο του πηγάδι κατά τη διάρκεια της λειτουργίας.Ελέγξτε και καθαρίστε το βάθος του πηγάδι πριν από την ανάγνωσηΌταν υπάρχουν σημαντικές επιδράσεις στην άκρη, αποφύγετε τη χρήση σπηλαίων στην άκρη ή την εφαρμογή επεξεργασίας υγρασίας.

5Ομοιογένεια φυσαλίδας και υγρού

Οι φυσαλίδες που δημιουργούνται κατά την προσθήκη δείγματος ή την ανακίνηση πλάκας μπορούν να επηρεάσουν σοβαρά τις μετρήσεις απορρόφησης.Αυτό οδηγεί σε ασυνήθιστα χαμηλές ενδείξειςΗ άνιση ανάμειξη υγρού μπορεί να οδηγήσει σε άνιση κατανομή συγκέντρωσης μέσα στο ίδιο πηγάδι.

Επιπτώσεις: Οι φυσαλίδες μπορούν να προκαλέσουν την υποτίμηση της ένδειξης με μία τρύπα κατά περισσότερο από 20%, ή ακόμη και να οδηγήσουν σε ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα.

Μέτρα ελέγχου: Αποφυγή σχηματισμού φυσαλίδων κατά την προσθήκη του δείγματος. Διατήρηση κατάλληλης ταχύτητας αναταραχής για την αποφυγή έντονης αναταραχής που μπορεί να προκαλέσει σχηματισμό φυσαλίδων.αφήστε το μείγμα να παραμείνει για 1 ̇ 2 λεπτά πριν από την ανάγνωση της μέτρησης για την εξάλειψη των φυσαλίδωνΕάν εντοπιστούν φυσαλίδες, αφαιρέστε τις χρησιμοποιώντας βελόνα ή φυγοκέντρωση για την εξάλειψή τους· για πηγάδια με ασυνήθιστα χαμηλές ενδείξεις, ελέγξτε για την παρουσία φυσαλίδων.

6. θερμοκρασία περιβάλλοντος και υγρασία

Η θερμοκρασία του περιβάλλοντος επηρεάζει τόσο τον ρυθμό αντίδρασης των αντιδραστηρίων όσο και την δραστηριότητα των ενζύμων, καθώς και τη σταθερότητα των ηλεκτρονικών εξαρτημάτων.διαταραχή της οπτικής διαδρομήςΑντίθετα, η ανεπαρκής υγρασία μπορεί να παράγει στατικό ηλεκτρισμό, επηρεάζοντας αρνητικά τη λειτουργία του οργάνου.

Επίπεδο αντίκτυπου: Μια διακύμανση θερμοκρασίας 5°C μπορεί να προκαλέσει αλλαγή του ρυθμού αντίδρασης κατά 10%~20%.

Μέτρα ελέγχου: διατήρηση της θερμοκρασίας εργαστηρίου μεταξύ 20-25°C και σχετικής υγρασίας μεταξύ 40%-70%· αποφυγή της άμεσης ροής αέρα από το σύστημα κλιματισμού στα όργανα.τοποθέτηση των οργάνων μακριά από πηγές θερμότητας και άμεσο ηλιακό φως; χρησιμοποιήστε μια θερμοκοιτίδα για επώαση· μην πραγματοποιείτε επώαση σε θερμοκρασία δωματίου.

7Δονήσεις και ηλεκτρομαγνητικές παρεμβολές

Οι εξωτερικές δονήσεις μπορούν να επηρεάσουν τη σταθερότητα της οπτικής διαδρομής, οδηγώντας σε διακυμάνσεις ανάγνωσης.που οδηγεί σε ανωμαλίες δεδομένωνΤο όργανο πρέπει να τοποθετείται σε ένα σταθερό εργαστήριο, μακριά από πηγές δονήσεων, όπως φυγοκεντρίστρες ή ταλαντωτές, καθώς και από ισχυρό ηλεκτρομαγνητικό εξοπλισμό.

Επίπεδο πρόσκρουσης: Οι δονήσεις μπορούν να προκαλέσουν διακυμάνσεις των ενδείξεων και μειωμένη επαναληψιμότητα.

Προφυλάξεις λειτουργίας: τοποθετήστε το όργανο σε σταθερό, επίπεδο εργαστήριο· κρατήστε το μακριά από πηγές δονήσεων και ισχυρό ηλεκτρομαγνητικό εξοπλισμό.Χρησιμοποιήστε έναν προσαρμογέα ρεύματος για να ελαχιστοποιήσετε τις παρεμβολές τροφοδοσίας· όταν είναι αναγκαίο, να χρησιμοποιείται ρυθμιζόμενη τροφοδοσία.

V. Οδηγός επιλογής της τυποποιημένης λειτουργίας προσαρμογής καμπύλης

Ο αναγνώστης ανάλυσης ανοσοαπορρόφησης MY-628 που συνδέεται με ένζυμα διαθέτει οκτώ ενσωματωμένες λειτουργίες υπολογισμού.ο κατάλληλος τρόπος προσαρμογής πρέπει να επιλέγεται με βάση τα χαρακτηριστικά της καμπύλης δόσης/απόκρισης της δοκιμής για να ληφθούν τα πιο ακριβή αποτελέσματα υπολογισμού συγκέντρωσης..

αρχή επιλογής:

1. Προτεραιότητα στον τρόπο τοποθέτησης που συνιστάται στο εγχειρίδιο χρήσης του κιτ.
2. Εάν δεν υπάρχει καμία σύσταση, επιλέξτε την κατάλληλη μέθοδο με βάση το σχήμα της τυποποιημένης καμπύλης: για μια γραμμική καμπύλη, επιλέξτε "γραμμική", για μια S-σχήμα καμπύλη,επιλέξτε "Λογαριθμική" ή "Απορρόφηση ποσοστό ∆ Λογαριθμική συγκέντρωση"; για σύνθετες καμπύλες, επιλέξτε "Cubic" ή "Spline".
3. Για να προσδιοριστεί η κατάσταση με τη μικρότερη απόκλιση ανακατάταξης, πραγματοποιείται επαλήθευση με τη χρήση τυποποιημένων υλικών αναφοράς.
4. Τα ποσοτικά αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός του εύρους της τυποποιημένης καμπύλης· εάν ένα αποτέλεσμα πέσει εκτός αυτού του εύρους, το δείγμα πρέπει να αραιωθεί και να αναλυθεί εκ νέου.

VI. Εφαρμογή της δοκιμής αναστολέα στην ασφάλεια των τροφίμων

Ο αναγνώστης ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) MY-628 είναι εξοπλισμένος με ειδική μονάδα μέτρησης του ρυθμού αναστολής.καθιστώντας το ιδιαίτερα κατάλληλο για εφαρμογές ταχείου ελέγχου στους τομείς των γεωργικών και των δοκιμών ασφάλειας των τροφίμων.

1Μέθοδος ρυθμού αναστολής ∆ αρχή ανίχνευσης

Η μέθοδος αναστολής βασίζεται στην αρχή της αναστολής των ενζύμων και χρησιμοποιείται συνήθως για την ταχεία ανίχνευση των υπολειμμάτων οργανοφωσφόρου και καρβαμιτικού φυτοφαρμάκου:

1. Η χοληνεστεράση καταλύει την υδρόλυση των υπόστρωτων (π.χ. ιωδίδιο θειοκυανοχολίνης), προκαλώντας μια χρωματιστηριακή αντίδραση.
2. Τα υπολείμματα φυτοφαρμάκων μπορούν να αναστέλλουν τη δραστηριότητα της χολινεστεράσης· ο βαθμός αναστολής είναι ευθέως ανάλογος με τη συγκέντρωση φυτοφαρμάκων.
3. Καθορίζεται εάν τα υπολείμματα φυτοφαρμάκων υπερβαίνουν το επιτρεπόμενο όριο μετρώντας το ποσοστό αναστολής της δραστηριότητας των ενζύμων μετά την προσθήκη του δείγματος.
4. Ποσοστό αναστολής (%): (1 ¢ Απορρόφηση δείγματος / Απορρόφηση σε κενό) × 100%
5. Όταν το ποσοστό αναστολής υπερβαίνει ένα κατώτατο όριο (συνήθως 50% ή 70%), το αποτέλεσμα ταξινομείται ως θετικό και απαιτεί περαιτέρω επιβεβαίωση με μέθοδο οργάνων.

2Βασικά επιχειρησιακά βήματα για τη μέτρηση του ποσοστού αναστολής

1. Εξόρυξη δείγματος: Εξόρυξη υπολειμμάτων φυτοφαρμάκων από δείγματα τροφίμων χρησιμοποιώντας τυποποιημένες μεθόδους.
2. Προετοιμασία αντιδραστηρίου: Τα αντιδραστήρια ενζύμων, τα υποστρώματα και τα χρωμογενή αντιδραστήρια πρέπει να παρασκευάζονται σύμφωνα με τις καθορισμένες απαιτήσεις.
3. Αντίδραση: Αναμειγνύεται το εκχύλισμα δείγματος με το αντιδραστήρα ενζύμου και εκκολάπτεται σε θερμοκρασία 37°C για καθορισμένο χρονικό διάστημα.
4. Προστίθεται το υπόστρωμα και το χρωμογενές αντιδραστήριο· μετράται η απορρόφηση μετά την ολοκλήρωση της αντίδρασης.
5. Το όργανο υπολογίζει αυτόματα το ποσοστό καταστολής και, συγκρίνοντάς το με το κατώτατο όριο, παράγει αποτέλεσμα προσδιορισμού.

Σημείωση: Η μέθοδος του ρυθμού αναστολής είναι μια τεχνική ταχείας ανίχνευσης· τα θετικά αποτελέσματα πρέπει να επιβεβαιώνονται με μεθόδους με όργανα όπως η χρωματογραφία αερίου ή η υγρή χρωματογραφία.δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί άμεσα ως βάση για την επιβολή κυρώσεων.

3Απαιτήσεις ελέγχου ποιότητας για τον προσδιορισμό του ποσοστού αναστολής

• Για κάθε παρτίδα δοκιμών πρέπει να περιλαμβάνεται ένας κενός έλεγχος και ένας θετικός έλεγχος.
• Η απορρόφηση του κενού δείκτη ελέγχου πρέπει να βρίσκεται εντός του φυσιολογικού εύρους (συνήθως > 0,3), γεγονός που δείχνει φυσιολογική δραστηριότητα των ενζύμων.
• Το ποσοστό αναστολής των θετικών ελέγχων πρέπει να φτάνει στο αναμενόμενο επίπεδο, γεγονός που δείχνει ότι το αντιδραστήριο είναι αποτελεσματικό.
• Για επαναλαμβανόμενες δοκιμές δειγμάτων, η διαφορά του ρυθμού αναστολής πρέπει να βρίσκεται εντός αποδεκτού εύρους.
• Χρησιμοποιείστε τακτικά πιστοποιημένα υλικά αναφοράς για την επαλήθευση της ακρίβειας των μετρήσεων

VII. Πέντε τυπικά σενάρια εφαρμογής

Σενάριο 1: Νοσοκομειακό Κλινικό Εργαστήριο Ιμμολογικών Ελέγχων

Κύρια πρόκληση: Μεγάλα κλινικά δείγματα και ευρύ φάσμα στοιχείων δοκιμής (π.χ. ορμόνες, δείκτες όγκων, αντισώματα λοιμώξεων, αυτοαντίσώματα κλπ.).) ̇ όταν τα αποτελέσματα των δοκιμών επηρεάζουν άμεσα την κλινική διάγνωση ̇ θέτουν εξαιρετικά υψηλές απαιτήσεις για ακρίβεια και αναπαραγωγικότητα, και πρέπει να συμμορφώνονται με τις απαιτήσεις εξωτερικής αξιολόγησης ποιότητας (ΕQA).

Λύση: Μια οκτάκτυπη κάθετη οπτική διαδρομή εξασφαλίζει τη συνέπεια μεταξύ των τρυπών με επαναληψιμότητα ≤ 0,3%, ικανοποιώντας τις απαιτήσεις ακρίβειας για τις κλινικές δοκιμές.Υποστηρίζει έως και 15 φίλτρα για ανίχνευση πολλαπλών διαδικασιών σε διαφορετικά μήκη κύματος· διαθέτει 500 σημεία αποθήκευσης προγραμμάτων για βολική πρόσβαση σε προκαθορισμένες παραμέτρους για κάθε στοιχείο δοκιμής· επιτρέπει την αποθήκευση έως 100.000 αποτελεσμάτων δοκιμής,διευκόλυνση της ιχνηλασιμότητας των ιστορικών δεδομένων και της εξωτερικής ανάλυσης αξιολόγησης της ποιότητας· περιλαμβάνει οθόνη αφής 7 ιντσών για οπτική διάταξη πίνακα, μειώνοντας τα σφάλματα λειτουργίας.

Σενάριο 2: Ίδρυμα δοκιμών για την ασφάλεια των τροφίμων

Πρόκληση: Τα δείγματα τροφίμων περιλαμβάνουν μια ευρεία ποικιλία τύπων και μεγάλων μεγεθών παρτίδων, με πολυάριθμες παραμέτρους δοκιμής, συμπεριλαμβανομένων των υπολειμμάτων φυτοφαρμάκων, των υπολειμμάτων κτηνιατρικών φαρμάκων, των μυκοτοξινών,και αλλεργιογόνων που απαιτούν τόσο ταχεία εξέταση όσο και ακριβή ποσοτική ανάλυσηΤα αποτελέσματα των δοκιμών έχουν άμεση επίδραση στην ασφάλεια των τροφίμων και στα συμφέροντα των επιχειρήσεων.

Λύση: ειδική μονάδα μέτρησης του ποσοστού αναστολής που υποστηρίζει ταχεία ανίχνευση υπολειμμάτων φυτοφαρμάκων· 8 τρόποι υπολογισμού που καλύπτουν τις απαιτήσεις ποσοτικής και ποιοτικής ανάλυσης·ευρύ εύρος μέτρησης 0 ′4.000 Abs, που επιτρέπει την ανίχνευση δειγμάτων τόσο σε υψηλά όσο και σε χαμηλά επ